嗜盐新型体解离方略.docVIP

嗜盐新型体解离方略在研究的工作基础上，开展了对可培养嗜盐放线菌分离方法的研究，并在近期取得了一些突破，仅从新疆艾丁湖地区土样就分离到100多株嗜盐放线菌，嗜盐放线菌的出菌率从10提高到90以上，并且克服了初期只能大量分类群、其它类群出菌率不高的现象，初步鉴定发现有大量非Nocardiopsis的Actinopa等嗜盐放线菌菌株。现就有关嗜盐放线菌分离方法的与初步经验加以介绍。　　盐浓度的分离效应盐浓度是盐环境嗜盐放线菌的主要限制性因子。不同盐浓度条件下，嗜盐放线菌的分离是有规律的。一般来讲，5NaCl（W/V）分离到的大多是耐盐Streptomyces类群，少数是耐盐Nocardes等类群，很少能分离到嗜盐放线菌。10NaCl分离的菌株，大多数也是耐盐放线菌，以Nocardiopsis占优势，还有少量Streptomyces，也能分离到少量的嗜盐No；15或以上NaCl分离到的多数菌株为嗜盐放线菌，而且种类丰富，主要类群有Actinospra以及少数Prauserella类群等。可见，要提高嗜盐放线菌的出菌率，盐浓度是一个重要的影响因子。　　复合盐效应长期以来用单一种类的盐NaCl来分离嗜盐放线菌，限制了对嗜盐放线菌的认识。我们的实验证明，单独用15或以上NaCl并不能提高嗜盐放线菌的出菌率。只有一定比例的复合盐才能大幅度提高嗜盐放线菌的出菌率。这是一个非常有趣，并值得进一步探索的问题。实际上，盐环境的离子类型是多种多样的，主要有8种离子：Na?、K?、Mg2?、Ca2?、Cl、SO42、CO32、HCO-3，但是不同盐湖、不同盐土之间，8种离子的组成和比例有较大的差异。长期栖息在那里的放线菌必然对不同离子及其不同浓度产生了选择性适应。因此，在设计分离程序时，应尽可能充分考虑复合盐这个环境因素。　　分离艾丁湖土样的实验证明，在4条件下，分离不到嗜盐放线菌；28分离到的嗜盐放线菌，以Noca为主要类群，还有部分Str等类群；37分离到的嗜盐放线菌，以Sachaora为主，也能分离到部分Streptra等类群。可见，嗜盐放线菌的分离存在明显的温度效应。　　分离培养基嗜盐放线菌的分离不是简单的用普通的培养基加NaCl就能实现的。如大多数嗜盐放线菌可以在添加10NaCl的ISP2培养基生长繁殖，但是用它几乎是分离不到这些嗜盐放线菌的。实验也证明，大多数用于普通环境放线菌分离的培养基并不适用于嗜盐放线菌的分离，如添加10NaCl腐质酸培养基、添加10NaCl几丁质培养基等几乎不能或很少能分离到盐环境嗜盐放线菌。这说明盐环境微生物同普通环境微生物的营养代谢类型、营养生理需求是有比较大的差异。用于选择性分离嗜盐放线菌的培养基的设计必须满足嗜盐放线菌的特殊需求。　　经过反复改良，我们推荐以下适宜盐环境嗜盐放线菌的分离培养基，供参考使用。　　（1）改良ISP5培养基：酵母膏5g，L门冬酰胺1g，甘油10g，K2HPO41g，KNO35g，微量盐1mL，MgCl26H2O200g，琼脂20g，蒸馏水1L.可选择性分离嗜盐或耐盐Nais类群及Actria.（2）淀粉酪素培养基：淀粉10g，水解酪素03g，KNO32g，MgSO47H2O005g，K2HPO42g，CaCO3002g，FeSO410mg，NaCl150g，琼脂20g，蒸馏水1L.可分离嗜盐或耐盐psis类群及嗜盐Stora.　　由于盐环境的特殊性和嗜盐放线菌营养生理的特殊需求都和普通环境有较大差异，因此嗜盐放线菌分离的思路，不仅要考虑盐环境的大环境，而且还应该充分考虑其微环境，尽可能地模拟盐环境条件，必须综合考虑特殊的分离条件（一定的盐浓度、一定比例的复合盐、某一温度），特殊的营养需求（适宜的培养基）等多种因素来设计分离程序。另外，分离程序要不断完善，不断更新，甚至永远更新。中国过滤与分离公共技术服务平台?????