重组DNA导入受体细胞1要点.ppt

第六章 重组DNA导入受体细胞的方法 1.DNA导入细菌的方法 2.DNA导入酵母的方法 3.DNA导入植物细胞的方法 4.DNA导入动物细胞的方法 转化 转染 转导 接合转移 1.重组体导入细菌细胞 （1）大肠杆菌 重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称之为转化（transformation)。 转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞，而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。 化学诱导感受态法 电转化 感受态细胞（competence cell）是指处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。 ★ ★ I. 化学诱导感受态法 原理：E.coli 细胞处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，细胞膨胀成球形，细胞膜形成液晶结构，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，液晶结构被扰动而使细胞膜出现间隙，促使DNA复合物进入细胞，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。 Ca2+处理的感受态细胞，其转化率一般能达到106～108转化子/?gDNA。 化学法简单、快速、稳定、重复性好，感受态细菌可以在-70℃保存，但转化DNA大小有限制，不同物种需要不同的诱导方法。