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蛋白质印迹 Western Blot Western Blot 的方法和操作要点。 【实验原理】 印迹法 Western Blot 一般由凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。 1.生物大分子凝胶电泳分离蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳，使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。 2.分子区带的转移和固定第二步就是把凝胶电泳已分离的分子区带转移并固定到一种特殊的载体上，使之形成稳定的、经得起各种处理并容易检出的，即容易和各自的特异性配体结合的固定化生物大分子。现用得最多的载体材料为硝酸纤维素膜 NC膜 和一种尼龙衬底的膜 ZB膜 ，它们和生物大分子都是非共价结合。 3.特异性谱带的检出 印迹在载体上的特异抗原的检出依赖于抗体、抗原的亲合反应。即将酶、荧光素或同位素标记的特异蛋白分别偶联在此特异抗体的二抗上，再分别用底物直接显色，测荧光，放射自显影等方法检测出我们感兴趣的抗原来，考虑到如果无合适抗体用来检测抗原时，可用一般的蛋白染料，如丽春红，检测转移到膜上的蛋白，验证转移是否成功。 I. SDS?PAGE 此部分见实验十二 II. 电转移 【仪器、材料与试剂】 一 仪器 1．高电流电泳仪 500mA上 2．电泳转移槽及转移夹 3．海棉块 4．滤纸 5．水平摇床