黑曲霉发酵生产α-淀粉酶1介绍.docVIP

产α-淀粉酶的黑曲霉上罐发酵技术和发酵动力学研究 摘 要：本实验通过对技术和发酵动力学研究变化趋势图，得到生产各项理化性质的改变，为提高发酵生产效率有指导意义。：黑曲霉发酵动力学 THE RESERCH ON FERMENTATION TECHNOLOGY AND FERMENTATION KINEYICS OF α- AMYLASE PRODUCTION ON ASPERGILLUS NIGER ABSTRACT: In this study, Aspergillus niger Fermentation on α- amylase and fermentation tank fermentation kinetics, 6h take a broth sample testing its pH value, enzyme activity, the amount of residual sugar and biomass four physiological indices, and every draw a trend change, resulting in changes Aspergillus niger α- amylase production process of the physical and chemical properties, improve the efficiency of fermentation of guiding significance for industrial production. KEY WORDS: α- amylase; Aspergillus niger; fermentation; fermentation kinetics α-淀粉酶普遍分布在动物、植物和微生物中，是一种重要的淀粉水解酶，它以随机作用方式切断淀粉、糖原、寡聚糖或多聚糖分子内的α-1，4葡萄糖糖苷键，产生麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是工业生产中应用最广泛的酶制剂之一［1］。耐酸性α-淀粉酶是在酸性条件下水解淀粉的酶类，其最适pH在4.0左右。自从日本研究者 Yasuji Minoda等人用黑曲霉生产耐酸性α-淀粉酶以来，各国都对耐酸性α-淀粉酶进行了研究，陆续发现枯草杆菌、河内氏α-淀粉酶4］。通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶的实验过程，熟悉发酵罐的构造和使用方法。初步了解发酵生产的原理和常规发酵参数的检测方法。 整个实验按照“菌种的培养 空消 实消 接种 发酵 放罐”的发酵过程进行。在整个发酵的过程中，每隔6h取一次发酵液样品检测其pH值、酶活、残糖量及生物量四个生理指标。最后将所测数据进行整理、分析，可以得出整个发酵过程各物质的生成和消耗的变化规律以及如何调整培养条件来提高发酵生产的效率，对大工业生产具有重要的指导意义。1 材料与方法 1.1.1材料与试剂 原料：黑曲霉 与：，蔗糖柠檬酸氢二，aCl2，FeSO4 ˙7H2O ，MgSO4˙7H2O，I2，KI ，K2HPO4 ，磷酸缓冲液（，，，%淀粉溶液，（植物油） 主要仪器和器材：搅拌罐，，灭菌器恒温培养箱，冰箱，水浴锅，，培养皿，三角瓶，小试管，大试管，移液枪分光光度计1.1.2 培养基 可溶性淀粉g，蔗糖g，柠檬氢二g， KH2PO4 15g，aCl2 0.5g，eSO4 ˙7H2O 0.5g，MgSO4˙7H2O 0.5g ，PH=5.0 ，消泡剂（植物油）ml，加水定容至L。 发酵罐机械搅拌发酵 2 实验内容 2.1实验步骤 2.1.1 空消 先开启蒸汽发生器，自有蒸汽产生并排掉管路中冷凝水后，按以下步骤进行： 1．先关闭所有阀门，检查处是否关紧密封，打开罐上方排气口。 2．蒸汽先进空气系统，蒸汽→蒸汽过滤器→分过滤器，无论蒸汽走到哪一路得先放尾阀，放出冷凝水，排掉冷空气，待有蒸汽冲出后调小，打开主阀。 3．再进罐体：由主路进罐，然后通入取料管路，再入补料系统（两边）。 4．罐压升至所需温度（121℃）时开始计时，保温保压30min。 保压方式：（1）调节主汽路进汽阀门控制进汽量；（2）调节排气口排气量大小或尾阀放汽量。 5．结束空消：（1）逆着蒸汽进路关，先关近罐阀。（2）同时准备好压缩空气确保蒸汽一停即充入无菌压缩空气以维持空气系统及罐内的正压。近罐空气阀的尾阀要一直微开启。 .1.2种子制备 接种黑曲霉于PDA液体培养基中，液体摇瓶培养。.1.3培养基配制、实消 关闭气路入罐阀，主汽路进汽→补料口进汽（方法同空消）→罐压升至0.12Mpa（121℃），保压、保温30分钟→实消结束。.1.4 冷却接种与发酵 待培养基冷却至28℃左右时，在加料口周围放一圈酒精棉球，点燃，在无菌条件下打开进料口，迅速接种。