因工程制药工艺资料.ppt

生物制药工程 主讲教师： 刘 凯 liukai_1982@163.com 山东农业大学生命科学学院微生物系 第六章 基因工程制药工艺 6.1 基因工程制药微生物表达系统 6.2 基因工程大肠杆菌的构建 6.3 基因工程菌的发酵培养与控制 基因工程技术—基因重组示意图 DNA片段经酶切、连接，形成重组DNA分子 导入宿主细胞系统中扩增 目标基因表达，生成新产物，出现新性状 6.2 基因工程大肠杆菌的构建技术 6.2.1 构建流程 6.2.2 目标基因的克隆 6.2.3 表达载体构建 6.2.4 工程菌构建 6.2.1 工程菌构建流程 6.2.2 目标基因的克隆策略 目标基因：编码蛋白质或多肽的DNA序列 正确克隆的重要性： 只要有一个碱基发生（错义、无义、移码）突变，就导致编码氨基酸的变化，影响产物蛋白质的功能和生物学活性。 只要一个碱基发生同义突变，就可能导致生产过程和效率变化。 基因克隆方法的选择 PCR技术 PCR（Polymerase chain reaction，聚合酶链式反应）：由DNA聚合酶催化下，对特定DNA序列进行的复制反应。 本质：生物体的DNA复制原理在体外合成基因。 发明者：Mullis，生物技术革命性象征，1993年获得诺贝尔化学奖。 在引物指导下，以DNA为模板，由DNA聚合酶催化