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重组质粒的构建、转化和重组子的筛选与鉴定 姓名:郑小煜 学号:201100140069 班级:11级生技班 同组者:赵莉、高瑞 【实验目的】 学习在实现DNA的体外重组过程中，正确选择合适的载体和限制性内切酶，并利用限制性核酸内切酶对载体和目的DNA进行切割，产生利于连接的合适末端。 通过对DNA的酶切，学习设计构建重组DNA分子的基本方法，掌握载体和外源目的DNA酶切的操作技术。 学习利用T4 DNA连接酶把酶切后的载体片段和外源目的DNA片段连接起来，构建体外重组DNA 分子的技术，了解并掌握几种常用的连接方法。 掌握利用CaCl2 制备感受态细胞的方法。 学习并掌握热击法转化E.coli的原理和方法。 在使用红白菌落法筛选获得重组子的基础上，本实验学习通过对重组子进行重组质粒DNA的抽提鉴定，以进一步确定重组质粒中含有外源目的DNA片段，验证重组子是期望的重组子的方法。 通过学习掌握重组DNA分子鉴定的基本方法。 掌握α互补筛选法筛选重组子的方法。并鉴定体外导入目的DNA片段的大小。 学习用试剂盒提取重组质粒DNA的方法。 复习琼脂糖凝胶电泳的原理及方法。 【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接即为DNA重组技术，这样重新组合的DNA分子叫做重组子。重组的DNA分子在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经限制性内切酶酶切的载体