一、动物细胞融合
1.概念:两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程,也称细胞杂交。
2.原理:与植物原生质体融合的原理相似,即膜的流动性。
3.结果:形成单核杂交细胞,具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
4.诱导方法:聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。
5.意义
(1)突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。
(2)是研究细胞遗传、免疫、肿瘤和新品种培育的重要手段。
(3)利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
二、单克隆抗体
1.传统抗体的制备
(1)方法
(2)缺点:产量低、纯度低、特异性差。
2.单克隆抗体的制备过(1)
(2)解决思路:将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞。
(3)制备过程
3.单克隆抗体的特点和应用
(1)优点:特异性强、灵敏度高、产量大。
(2)应用
①作为诊断试剂,具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和运载药物。
一、动物细胞融合
阅读教材P52,仔细观察图2-23,探讨下列问题:
1.比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的区别。
植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 方法步骤 去掉细胞壁后诱导____融合,形成杂种细胞,再经过____________形成杂种植株 分散成单个细胞后诱导细胞融合,形成杂交细胞 诱导手段 离心、振动、电激、聚乙二醇等 聚乙二醇、________、电激等 用途 克服远缘杂交不亲和的障碍,培育具有优良性状的杂种植株 培育杂交细胞,制备单克隆抗体 提示:细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 原生质体 植物组织培养 灭活的病毒
2.诱导动物细胞融合特有的诱导手段是什么?
提示:灭活的病毒。
二、单克隆抗体的制备
阅读教材P52~54,仔细观察图2-24,探讨下列问题:
1.单克隆抗体制备时为什么用免疫小鼠?
提示:免疫小鼠能产生相应的B淋巴细胞,从而产生抗体。
2.为什么用多个B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合?
提示:(1)细胞融合成功率太低,仅用两个细胞融合,不一定能得到融合细胞。
(2)用大量免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合,并从融合细胞中筛选才能得到分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
3.细胞融合后会得到哪些杂交细胞?我们需要的是哪种杂交细胞?
提示:得到的细胞有:未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞(融有2个B淋巴细胞核或是2个骨髓瘤细胞核)、融合的杂种细胞(即杂交瘤细胞)。需要的是杂交瘤细胞。
4.对得到的杂交瘤细胞还需做哪些处理?为什么?
提示:筛选、克隆化培养、抗体检测。因为培养的目的是获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
5.在单克隆抗体制备过程中经过了几次筛选?作用分别是什么?
提示:两次。第一次:从多种杂交细胞中筛选出杂交瘤细胞。第二次:利用专一抗体检测阳性,筛选出能够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞群。
6.获取单克隆抗体的场所在哪里?
提示:(1)若在培养基中进行杂交瘤细胞培养,则从培养液中提取。(2)若在小鼠或其他动物腹腔中培养,则从腹水中提取。
7.请写出单克隆抗体的制备流程。
提示:
下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,描述正确的是( )
A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法也完全相同
B.只有植物体细胞杂交可跨越种属间的生殖隔离,突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能
C.利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为生产单克隆抗体开辟了新途径
D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物,并使它们的性状全部得以体现
[解析] 动物细胞融合的诱导方法有生物方法,如用灭活的病毒,而植物原生质体融合没有生物方法;两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物,并不一定使它们的性状都能得以体现,这是基因选择性表达的结果。
[答案] C
动物细胞融合中的诱导剂
(1)常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。
(2)用作诱导剂的病毒必须事先灭活,使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答问题:
(1)制备单克隆抗体过程中要用到________________和________________技术。
(2)制备单克隆抗体过程中,给小鼠注射的HCG相当于________,使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞,此过程属于特异性免疫中的________免疫。
(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径,主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以阻断此途径;另一辅助途径是在次黄嘌呤和
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