人胰腺癌肿瘤干细胞中Oct4和Nanog基因表达的研究2创新.docVIP

RT-PCR测定人胰腺癌干细胞Oct4和Nanog基因表达 陈锦鹏 王志伟 陆玉华 陆俊杰 钱海鑫* 【摘 要】目的 研究胚胎干性相关基因Oct4和Nanog在人胰腺癌肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞中表达的差异。方法 流式细胞仪，在人胰腺癌Panc-1细胞系中分选CD44+CD24+及 CD44+CD24+ESA+ 肿瘤干细胞，用RT-PCR法、荧光定量PCR法测定其Oct4、Nanog基因的表达情况。结果 Oct4及Nanog基因在CD44+CD24+ESA+细胞中及CD44+CD24+细胞中表达均高于Panc-1细胞。结论 1.干细胞相关基因Oct4、Nanog在胰腺癌Panc-1肿瘤干细胞中的表达高于普通胰腺癌细胞，并且其表达量与干细胞纯度成正相关。 关键词：胰腺癌，肿瘤干细胞，Nanog，Oct4 【Abstract】Objective To study and comparison the gene expression of Oct4 and Nanog that related to embryonic stem cell in human pancreatic cancer stem cell. Methods Isolate pancreatic cancer stem cells of CD44+CD24+and CD44+CD24+ESA+ phenotypes by a FACS Aria II in human cell line Panc-1. Detect the expression of Oct4 and Nanog gene in Panc-1 cell and two kinds of cancer stem cell-like cells by RT-PCR, Q-PCR . Results Oct4 and Nanog genes have a higher expression in CD44+CD24+ESA+ cells and CD44+CD24+ cells than Panc-1 cells. . Conclusions 1. Oct4 and Nanog gene perform a higher expression in pancreatic cancer stem cell than in Panc-1 cell. The express level is positive correlated with the purity of cancer stem cell. Keywords Pancreatic cancer，Cancer stem cell，Oct4，Nanog [基金项目] 国家自然科学基金资助课题（江苏省自然科学基金（BK2010276） [作者单位] 陈锦鹏 南通大学附属医院 苏州大学医学院博士研究生 [通信作者] 钱海鑫 苏州大学附属第一医院胰腺癌在癌症致死病因中排在第四至第五位，其五年生存率不足5%，中位生存期仅6个月[1]。胰腺癌最让人头疼的问题之一是他对传统治疗手段普遍耐受[,3]，很多研究发现，在接受传统放化疗之后胰腺癌开始变得耐药，使预后变差[]。目前人们对胰腺癌的传统治疗无法改变这一现状，而基于胰腺癌手术标本和细胞系的基因表型和蛋白表达方面的研究[]也未取得令人满意的结果。研究者们在不断尝试着胰腺癌治疗的新方法，他们希望通过胰腺癌干细胞的研究，发现干细胞特有的标记物，从而特异性的杀灭肿瘤干细胞。一系列的研究将矛头指向了可能存在并发挥关键作用的胰腺癌干细胞，胰腺癌干细胞属于肿瘤干细胞(Cancer Stem Cell, CSC)，他们能自我更新和多向分化，并且还有强大的侵袭、转移和耐药的能力。 基因名称 基因编号 引物序列 产物长度 Oct4 NM_002701.4 F：5-ATTCAGCCAAACGACCATCT-3 193bp R：5-TCTCACTCGGTTCTCGATACTG-3 Nanog NM_024865.2 F：5-AAGAACTCTCCAACATCCTGAAC-3 129bp R：5-CCTTCTGCGTCACACCATT-3 GAPDH NM_002046.3 F：5-CTCCTCCACCTTTGACGCT-3 187bp R：5-GGGTCTCTCTCTTCCTCTTGTG-3 2. 结 果 2.1 胰腺癌细胞的培养和干细胞的获得 普通胰腺癌Panc-1细胞在含10%FBS的完培中呈梭形，贴壁生长，增殖较快，约2-3天传代（见图1）。分选出的CD24+CD44+细胞和CD24+C