小檗碱-壳聚糖复合膜在桃保鲜中对桃褐腐病菌的控制介绍.doc

小檗碱-壳聚糖复合膜在桃保鲜中对桃褐腐病菌的控制 摘要—简介 由真菌桃褐腐病菌引起的桃褐腐病是桃储存期间一种常见的疾病，导致相当大的经济损失。我们前期的研究发现天然生物碱小檗碱对桃褐腐病菌有明显的抑制作用。材料方法：制备具有缓释作用的小檗碱- 壳聚糖复合膜（BCCM）4℃环境中，并做以下处理：(I)确保果实是没有外包装的；(ii)在取出果实后立即将其浸在预凝固的BCCM液中然后取出；(iii) 果实的涂层用BCCM，或用壳聚糖膜（不含小檗碱）；(iv)用PVC作果实涂层。结果和讨论：在储存40后，由于乙酸的细胞毒性,浸在BCCM溶液中的组显示出高感染率，但涂了BCCM涂层组只有10％BCCM涂层组能显著降低感染率，清楚地证明了小檗碱的抗菌活性。因此，用BCCM薄膜包装桃果实并保存于4℃环境中，桃果实可以被很好地保存了40天，感染率很低。结论：考虑到其安全性和低成本，小檗碱- 壳聚糖复合膜可以适用于在桃存储中疾病的控制。 1简介 桃(Prunus persica L.)是一种在全世界广泛种植，深受人们的喜爱的水果。由于它的收获期大约是在夏天和秋天温度较高时，果实很容易被真菌或细菌侵染，从而迅速腐烂。在众多影响储存的因素中，由子囊真菌桃褐腐病菌引起的桃褐腐病是主要的疾病。在过去的十几年中无数的化学试剂用来控制这种疾病[1, 2]，但是由于化学杀菌剂的频繁应用使得桃褐腐菌产生了抗药性[1–5]。显然，常规化学杀菌剂不仅对桃褐腐菌没有作用了，而且也造成了环境的污染，使水果受到污染，进而造成对人类的威胁。由于以上这些原因，有必要从自然界寻求能替代的化合物。 近年来，天然药物杀菌剂得到了广泛的研究[6, 7]，.我们先前的研究报道小檗碱对桃褐腐菌有显著的抑制作用[8]，这一发现引起了我们用小檗碱控制褐腐病的兴趣。除了小檗碱以外，壳聚糖，一种研究的较为透彻的天然高分子材料，具有多种性能，如抑菌性[9–11],，成膜性，和环境友好性等，而且这些特征已经在植物保护和水果蔬菜的贮存中得到证实[12, 13]。 在本研究中，整合小檗碱壳聚糖的优点，研究小檗碱- 壳聚糖复合膜（以下简称BCCM）制备以及在桃贮存病害控制方面的应用。对实验水果进行浸泡或者涂膜处理，将其储存在4℃环境中，测失重率和感染率。BCCM薄膜表现出显著的抗菌活性和极可观的保鲜效果。由于壳聚糖和小檗碱都是可生物降解、可食用的，BCCM不会带来新一波的“白色污染”，这对人类是有益的。因此，它在桃存储期病害管理方面有广阔的前景。 2材料和方法 2.1试剂和仪器 85％脱乙酰度的壳聚糖，从金壳生物化学有限责任公司（中国）购买。小檗碱购自中国国家机构药品生物制品检定所。其他试剂均为分析纯。恒温振荡器和紫外 - 可见分光光度计是Varian公司，美国的产品。 2.2复合膜的制备 根据以前的实验，二十克壳聚糖粉末加入到1000毫升的2％乙酸溶液中，当完全溶解以后再分别按照10%(mL/mL)加入甘油、234.38 μg·mL-1加入小檗碱。将混合物在室温下不断地搅拌，直到壳聚糖和小檗碱完全溶解，最终成为高粘度的溶液，然后保温培育以完全去除气泡。将其倒到一个平板铺平后，在室温下空气干燥30小时，将膜轻轻剥离（命名为BCCM）。?无小檗碱的膜被命名为壳聚糖膜（CM）。 2.3 BCCM中小檗碱释放试验 为了确定小檗碱从BCCM的溶解速率，选择pH值6.8磷酸盐缓冲作为发送器。将BCCM的小碎片密封在透析袋中，将透析袋放入磷酸盐缓冲液中。将BCCM碎片用恒温型振荡器在27℃以每分钟100rpm旋转的，在设置的时间采样，每次采样后添加相同剂量的新鲜缓冲液。通过测定溶液在345nm处紫外吸收来测定小檗碱的吸光度，再将其变换为浓度值。小檗碱的的累积释放百分比按照以下公式计算： 释放率 (%) = C × [V / M] × S 其中“C”是在每个取样时间溶液中小檗碱浓度 （μg·ml-1 ）；“V”是采样介质的体积（ml）；“M”表示BCCM的重量（mg）; “S”表示的载药量[14]。 2.4 BCCM的抗真菌活性的研究 从北京市平谷区（中国）商业果园采集桃褐腐菌，培养在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基中，通过无菌水冲浸生长菌的方式采集孢子。菌丝体经过滤筛选。孢子悬浮液以5×104个·mL-1的浓度均匀地分散在PDA平板，在中心放置一个小片BCCM/ CM，一个相同的但没有放BCCM/ CM薄片的PDA平板作对照。PDA平板在在27℃下培养并进行后续观察。所有操作都在无菌条件下进行，每个实验重复做三次。 2.5桃在4℃下储存 Okubao桃是在北京市平谷区是一个主要品种。重量相近的无病果实用自来水进行洗涤并在空气中干燥，三组的水果分别用传统的PVC膜，CM和BCCM封装。没有包装的水果用作对照。所有水果