分光光度法及比色皿的使用方法.ppt

分光光度法及比色皿的使用方法 1、分光光度计的原理 分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来测量微量物质浓度的仪器，具有灵敏度、准确度高，操作方便、快速等特点。 其工作原理为光的吸收定律（朗伯—比尔定律）：一束单色光通过某吸光物质的溶液时，其光能量的被吸收与该物质浓度的关系符合朗伯-比尔定律，即当入射光波长、温度和溶液的厚度一定时，吸光度与溶液的浓度成正比。 722型分光光度计能在近紫外、可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析,数字显示读数。 使用方法 (1)开启电源，指示灯亮，仪器预热20分钟，选择开关置于“T”。 (2)旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。 (3)将装有对照组溶液的比色皿放置比色架中。 (4) 盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“T”旋钮，使数字显示为“100.0”;调节“A”旋钮，使数字显示为“0” 。重复一次 (5)将选择开关置于A ，轻轻拉动试样架拉手，将被测溶液置于光路中，显示值即为试样的吸光度A值。 (6)实验完毕切断电源，将比色皿取出洗净 (5) 盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“T”旋钮，使数字显示为“100.0”;调节“A”旋钮，使数字显示为“0” 。 (6)将选择开关置于A ，轻轻拉动试样架拉手，将被测溶液置于光路中，显示值即为试样的吸光度A值。 (7)实验完毕切断电源，将比色皿取出洗净 注意事项 为了防止光电管疲劳，在预热及不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命 如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟后才能正常工作。（因波长由长波长向短波长或短波向长波移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应较慢，需一段光应平衡时间） 保证每次测试时，比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度 注意不要有任何液体滴落在仪器上，一旦有这种现象发生，要在第一时间内使用专用的清洁工具进行擦拭 比色皿的正确选择 比色皿透光面是由能够透过所使用的波长范围的光的材料制成。在200-350nm工作的比色皿适用于紫外区,必须使用石英或熔熔硅石制成透光面的石英比色皿。石英比色皿既可用于紫外区又可用于可见区，但是价格一般比较贵，所以要根据使用波长选择比色皿，如果不用紫外区的话，可用普通玻璃比色皿 比色皿的正确使用及注意事项 比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面粘结而成。所以使用时应注意以下几点: 在使用比色皿时,两个透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保证在测量时,入射光垂直于透光面,避免光的反射损失,保证光程固定 拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面 不得将光学面与硬物或脏物接触。 盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然后再用镜头纸或丝绸擦拭。 -务必保持比色皿透光面的清洁。不要用手摸比色皿的光滑的表面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影响读数的准确。 -脏的比色皿可浸泡在肥皂水中，然后再用自来水和蒸馏水冲洗干净。倒置晾干备用。 -每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 -比色皿的内部的清洗只能用蒸馏水润洗（用洗瓶），不可用卫生纸或其他物品捅进去擦洗，使用完毕后先用自来水内外冲洗干净比色皿，再用洗瓶冲洗比色皿的内外表面1次，将其粗糙面朝下斜靠在培养皿中 凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长期盛放在比色皿中 不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤 使用完毕后，两手捏住比色皿，将比色皿中的液体沿着比色皿的一个角倒入废液瓶，这时不要着急将比色皿离开废液瓶，而是顺势将比色皿的倒出角贴到废液瓶上，让比色皿里面的液体全部沿着这个角流出，这样，比色皿的光面上几乎不会粘有液体，也就不用再去用滤纸或脱脂棉擦拭，减少擦拭次数，这样就会延长比色皿的使用时间。直接口向下放在干净的滤纸上吸干剩余液，然后用蒸馏水冲洗比色皿内部 在使用过程中，应先用蒸馏水清洗比色皿内壁后，再用少量待测液润洗比色皿内壁，之后倒掉，再倒入待测液进行测定 比色皿的洗涤方法 分光光度法中比色皿洁净与否是影响测定准确度的因素之一。因此，必须重视选择正确的洗净方法 比色皿在使用后,应立即用水冲洗干净。必要时可用1∶1的盐酸浸泡,然后用水冲洗干净  如测定溶液是酸，可用弱碱溶液洗;如测定溶液是碱，可用弱酸溶液洗;如测定溶液是有机物质，可用有机溶剂，比如酒精等溶液洗。 选择比色皿洗涤液的原则是去污效果好，不损坏比色皿，同时又不影响测定。 分析常用的铬酸洗液不宜用于洗涤比色皿，这是因为带水的比色皿在该洗液中有时会局部发热，致使比色皿胶接面裂开而损坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还很可能残存微量铬，其在紫外区有吸收，因此会影响铬及其他有关元素的测定。一般主张使用过氧化氢和