DNA的损伤和修复-危当恒.ppt

DNA的损伤和修复 南华大学心血管疾病研究所 动脉硬化学湖南省重点实验室 危 当 恒 第一节 多种因素可引起DNA损伤并具有各自的机制 DNA损伤：指在生物体生命过程中DNA的组成及结构发生改变。 诱发DNA损伤的因素： 环境因素：辐射、化学毒物、药物、病毒感染、植物和微生物代谢产物等。 生理因素：机体代谢过程中产生的有毒物质、DNA复制错配、DNA本身的热不稳定性。 （一）辐射致DNA损伤 根据作用原理的不同： 电离辐射（α粒子，β粒子，γ射线，Χ射线等） 直接作用：能量直接传递给大分子而引起结构的破坏 间接作用：辐射先作用于溶剂分子而产生活性物质从 而导致细胞损伤 非电离辐射（紫外线以及能量低于紫外线的电磁辐射） （二）自由基致DNA损伤 自由基：指能够独立存在，核外带有未配对电子的原子和分子。 自由基的产生可以是外界因素与体内物质共同作用的结果。 自由基可导致碱基、核糖、磷酸基的损伤，引起DNA的结构和功能异常。 （三）化学毒物致DNA损伤 按其作用原理可分为： 碱基类似物 碱基修饰物 嵌入染料 二、DNA损伤的类型 DNA分子中的碱基、核糖和磷酸二酯键等均是DNA损伤作用的靶点。 常见的损伤有:碱基脱落、碱基破坏、嘧啶二聚体形成、单链和双链DNA断裂、DNA交联、DNA-蛋白质交联等。 （一） 碱基和核糖的破坏 由于碱基或者核糖的损伤，在DNA链上形成不稳定位点，最终可导致DNA链的断裂。 （三） DNA链断裂 碱基的破坏和脱落在DNA链上形成的不稳定位点是DNA链断裂的间接原因。 磷酸二酯键的断裂和脱氧戊糖的破坏是引起DNA链断裂的直接原因。 （四）DNA交联 链间交联：DNA双螺旋链上一条链上的碱基和另一条链上的碱基以共价键结合 链内交联：DNA分子中同一条链内的两个碱基以共价键结合 DNA－蛋白质交联：DNA和蛋白质以共价键结合 第二节 DNA损伤的修复 DNA损伤的修复：指纠正错配的碱基，清除DNA链上的损伤，恢复DNA正常结构的过程。 常见的DNA修复方式：回复修复、切除修复、错配修复和重组修复 (一）回复修复 回复修复 细胞对DNA的某些损伤可以用很简单的方式加以修复，在单一基因产物的催化下，一步反应就可以完成。这种修复方式叫回复修复。 包括：酶光学复活、嘌呤的直接插入、O6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移、单链断裂重接等。 3）DNA单链断裂重接 DNA单链断裂中有一部分是通过简单的重接而修复的，只需要一种酶——DNA连接酶(ligase)参加，因此也属于直接回复。 DNA连接酶能催化DNA双螺旋结构中一条链缺口处的5’磷酸根与相邻的一个3’羟基形成磷酸二酯健。连接所需的能量ATP(如动物细胞)。 将损伤的部位（或连同其附近的一定部位）切除，然后用正确配对的、完好的碱基替代修复。有多种酶和基因参与 过程：识别（损伤位点）→切除→修复（补）→连接 1)碱基切除： 特点是切除受损伤的碱基。主要过程是水解受损伤的碱基与脱氧核糖磷酸链之间的N—糖苷键。反应由一类糖基化酶催化。 也即：糖基化酶→APS→内、外切酶去除残基→以对侧链为模板修补→DNA连接酶连接 整个修复过程可分以下几步。 E．coli的核苷酸切除修复机理。 在E．coli中，UvrA，UvrB，UvrC三种蛋白是必需的。而且必须同时存在才能发挥作用，所以也叫UvrABC切除核酸酶。UvrA是一种腺苷三磷酸酶，是损伤识别蛋白。它与UvrB 结合成A2B1复合物，结合在损伤区，使DNA解旋、扭曲，并引起UvrB构象改变，与损伤部位形成紧密的结合。然后UvrA与UvrB—DNA复合物解离，后者成为UvrC特异结合靶。 UvrB 在损伤的3’侧作一内切，随而复合物构象改变， UvrC 得以在5’侧作第二个切口。解旋酶 Ⅱ(UvrD)使寡聚核苷酸片段及UvrC从DNA链上释放，然后DNA聚合酶Ⅰ取代UvrB。修补缺损区；最后由连接酶连接补片。 当DNA双链发生严重损伤时需要另一种机理来完成正确的修复。 一种情况是两条链同时受到损伤；另一种情况是单链损伤尚未修复时发生了复制，造成对应于损伤位置的新链缺乏正确模板； 此时需要重组酶系将另一段未受损伤的双链DNA移到损伤位置附近，提供正确的模板，进行重组。这便是重组修复。 二、参与DNA修复的主要基因 DNA修复相关基因： 直接参与DNA修复的基因 DNA修复调控相关的基因 第三节 DNA损伤修复与疾病 一、DNA损伤与肿瘤 二、DNA损伤修复缺陷导致人类的遗传疾病 （1）DNA