人血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA检测试剂盒说明书创新.doc

人血管内皮钙粘着蛋白复合体（）ELISA 本试剂仅供研究使用 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血管内皮钙粘着蛋白复合体（VE-cad）含量。 试验原理： VE-cad试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知VE-cad浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将VE-cad和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中VE-cad的浓度呈比例关系。 ? 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型 生物素标记的抗VE-cad抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型 洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释 底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型 标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型 ? 自备材料 1．? 2．? 5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．? ? 安全性 1．? A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．? 3．? ? 操作注意事项 1．? 2．? 3．? 4．? A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．? 6．? 7．? A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．? 9．? ? 样品收集、处理及保存方法 1、? －－－－-1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、? －－－－-EDTA1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、? －－-1000g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、? －－－－-1000×g离心10分钟，取上清液 5、? －－－－－－-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 ? 试剂的准备 1．? 80 ng/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 40 ng/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 20 ng/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 10 ng/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 5.0 ng/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 2.5 ng/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 0 ng/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 ? 2．? 50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。 ? ? 操作步骤 1．? 2．? 1：1稀释后加入50ul于反应孔内。 3．? 50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 4．? 30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5．? 80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6．? 30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7．? A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 8．? 50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9．? 450nm波长处测定各孔的OD值。 ? 建议使用的实验方案 ? 标准品浓度（ng/ml） ? A 80 80 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 B 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 C 20 20 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 D 10 10 样品 样品 样品 样品 样品 样品