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实验二 蛋白质分子量的测定——凝胶层析法 一、原理 凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法，又叫分子筛层析法，排阻层析法。凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同的进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开来一样。但是这种“过筛”与普通过筛不一样。将凝胶颗粒在适宜溶剂中浸，使充分洗液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而言凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，而使样品分子不同的分子得到分离。 凝胶室又叫退溶液凝结而成的固体物质，不论是天然还是人工合成凝胶，他们的内部都具有很多和微细的多孔网状机构，凝胶层析法常用天然凝胶是琼脂凝胶，人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶，和葡萄糖凝胶，具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。这种聚合物的立体网状结构，起孔隙代销与被分离物质分子的大小有相似的数量级，在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只能有相应的小分子可以通过，适用于分离小物质。相反，交联度低的孔隙大，适用于分离大分子的物质。利用这种性质可分离不同分子量的物质。 以下进一步来说明凝胶层析的原理。将凝胶装在柱子里，柱床体积称为总体积，以Vt表示。实质上Vt是由Vo、Vi与Vg三部分组成，既Vt=Vi+Vg+Vo。Vo称为孔隙体积或者外体积，又称为外水体积，