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- 2016-06-10 发布于湖北
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3.2.4 结合物的保存 酶和抗体均为生物活性物质,易失活。高浓度较为稳定,冻干后可在普通冰箱中保存一年左右。结合物溶液中加入等体积的甘油,加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素(例如庆大霉素)和防腐剂(HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠)。 3.2.5 结合物的稀释液 用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为避免结合物在反应中直接吸附在固相载体上:0.1%牛血清白蛋白, 0.05%吐温20 。试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液,使用时不需再行稀释,在4-8℃保存期可达6个月。 试剂准备 C 酶的底物 3.3 酶的底物 3.3.1 HRP的底物 OPD氧化后的产物呈橙红色,用酸终止酶反应后,在492nm处有最高吸收峰,灵敏度高,比色方便,是HRP结合物最常用的底物。 DH2+ H2O2 D+ 2H2O 上式中, DH2为供氧体, H2O2为受氢体。 DH2一般为无色化合物,经酶作用后成为有色的产物。 DH2如:邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)和ABTS 。 E TMB经HRP作用后共产物显蓝色。TMB性质较稳定,可配成溶液试剂,只需与H2O2溶液混和即成应用液。酶反应终止后,TMB产物由蓝色呈黄色,可在比色计中定量,最适吸收波长为450nm。 ABTS虽不如OPD和TMB敏感,但
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