1.2基因工程的基本操作程序技术方案.pptVIP

变性 方法： DNA分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 如果显示出杂交带，就表明待测样品目的基因已经转录。 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法：抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 证明：提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 2.鉴定——个体生物学水平的鉴定 抗虫、抗病结种实验，活性比较实验 1、有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 课堂练习 A 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 课堂练习 D 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 存活的大肠杆菌 培养 培养 质粒来源： 大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 人工改造质粒 （选择具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因农杆菌） 质粒 知识拓展 Hin d限制性酶ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的DNA 质粒 构建表达载体 四环素抗性基因由于目的基因插入而失活，形成只具有氨苄青霉素抗性基因 DNA连接酶 人类胰岛素的基因 培养 培养 培养 导入 含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 两种培养基均不能生长大肠杆菌 Ca2+ 处理细胞形成感受态细胞 检测 （培养不具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌） 只有氨苄青霉素抗性基因质粒 只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌 不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌 完全培养基 培养 检测含重组质粒的大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 （大肠杆菌内含有氨苄青霉素抗性基因，不含有四环素抗性基因） 只具有氨苄青霉素抗性基因农杆菌 不存活 存活 证明：目的基因已导入质粒 证明：重组质粒已导入大肠杆菌 培养 培养 完全培养基 40.【生物—选修3现代生物科技专题】（15分） 根据基因工程的有关知识，回答下列问题： （1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 ＿ ＿ ＿ 和 。 （2）质粒运载体用EcoR Ⅰ切割后产生的片段如下： ＿＿＿ ＿＿＿ 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是＿＿＿ ＿＿＿ ＿＿＿ ＿＿＿ ＿＿＿ ＿＿＿ 。 粘性末端 平末端 切割产生的DNA片段末端与EcoR Ⅰ切割产生的相同 （3）按其来源不同，基因工程找那个所使用的DNA连接酶有两类，即＿＿＿ DNA连接酶和＿＿DNA连接酶。 （4）反转录作用的模板是 ，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用＿＿＿ 技术。 （5）基因工程中除质粒外， ＿＿＿ 和＿＿＿ ＿也可作为运载体。 （6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是＿＿＿ ＿＿＿ ＿＿＿ 。 大肠杆菌 mRNA（或RNA） 产物是c DNA（或DNA）。 PCR 噬菌体 未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱 T4 动植物病毒 下课了! * DNA复制主要在细