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mTOR抑制剂的筛选方法 【摘要】雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是是丝氨酸/苏氨酸激酶分子靶位。mTOR是细胞生长增生的中心调控者，直接或间接参与细胞生长增生有关环节的调控。人体多种肿瘤细胞中可见mTOR通路的失调。近年来，有关mTOR抑制剂的专利申请不断增加，设计、合成、筛选结构新颖的mTOR抑制剂已经成为抗肿瘤药物研发的重大课题。本文就mTOR的结构功能、信号转导通路及mTOR抑制剂的筛选方法进行简单的介绍。 【关键词】雷帕霉素靶蛋白 雷帕霉素靶蛋白抑制剂 药物筛选 TOR(target of rapamycin，雷帕霉素靶蛋白)是一类进化上非常保守的蛋白激酶家族，广泛存在于各种生物细胞中。 1994年，Brown等证实并克隆了哺乳动物TOR基因，其产物只有一种蛋白，即mTOR(mammalian target of rapamycin，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)。mTOR属P13K蛋白激酶类家族，是P13K／PKB信号通路下游的一个效应蛋白，其底物主要控制与细胞生长和增殖密切相关的蛋白质的合成。mTOR控制细胞内mRNA的翻译，参与膜蛋白转运，蛋白质降解，蛋白激酶C信号转导和核糖体合成等一系列生理病理过程。 mTOR的分子结构 mTOR分子结构复杂，由2 549个氨基酸残基组成，分子中有数个各自独立而保守的结构域，类似于酵母中TOR的结构。mToR分子的氨基端存在20个串联重复序列，每一个重复序列包含2个分别由40个氨基酸残基组成的α螺旋，每个螺旋都有一个亲水基团和一个疏水基团。这种重复结构介导蛋白质之间的相互作用，并有利于mTOR定位于浆膜。 mTOR分子羧基端的中部是蛋白激酶域，结构和P13K激酶的催化域相似。蛋白激酶域的上游是FRB域，为FKBPl2一雷帕霉素复合物与mTOR相互作用的区域，该区发生突变后可以完全阻止雷帕霉素对mTOR的抑制作用。FRB 下游大约500个氨基酸残基处为FAT域，作用可能是与mTOR分子末端的FATC域形成一个空间结构，从而暴露mTOR分子的催化域。FATC域和NRD域位于mTOR分子羧基末端，其中NRD域在FATC和激酶催化域之间，是mTOR的负性调节域，而FATC域对mTOR的活性有着至关重要的作用，FATC结构中任何一个氨基酸残基的缺失都能使mTOR丧失催化能力。 由于mTOR包含的几个相对独立的结构域都能够和其他蛋白质发生作用，因而其能结合不??的蛋白质。实际mTOR存在两种复合物形式，这两种复合物的结构在细胞中都是相对保守的。 mTOR形成的两种不同复合物——mTORC1和mTORC2。已知的mTOR对肿瘤细胞生长、分化和代谢的作用均由mTORC1完成，mTORC2对雷帕霉素不敏感。 FRB区，这个区域为免疫抑制剂FK506结合蛋白与雷帕霉素的结合位点，是雷帕霉素与mTOR相互作用的区域。所以这个区域突变后可完全阻止雷帕霉素对mTOR的抑制作用，FRB区之后为激酶区，作用是使丝氨酸苏氨酸发生磷酸化。最后的FATC为FAT碳末端区。FAT和FATC区可调节mTOR激酶的活性。 mTOR的信号转导通路 mTOR可通过P13K／AKT途径或AMPK途径来发挥作用。目前研究较多的是P13K／AKT途径。该途径在肿瘤中常被过度激活，使细胞周期调节失控，引起细胞转化和肿瘤进展。 正常情况下，生长因子诱导mTOR的活化是通过激活P13K实现的。P13K可磷酸化肌糖环3-羟基的磷酸肌醇。细胞膜3-磷酸磷脂(P13Ps)与Akt的PH区域连接，导致Akt转位至浆膜，从而与磷酸肌醇依赖性激酶1(PDKl)接触。PDKl负责Akt的磷酸化，从而激活Akt。激活的Akt可磷酸化结节性硬化复合体2(TSC2)并减弱后者对mTOR的抑制作用。Akt和P13K在功能上属于原癌基因，受到抑癌基因PTEN的负性调节。PTEN可使肌糖环3-羟基的磷酸肌醇磷酸化，在胚胎发育、细胞迁移、凋亡和有效终止P13K介导的信号转导方面起着关键性的作用。PTEN突变在人类实体肿瘤非常常见。 活化的P13K位于细胞膜，可催化磷脂酰肌醇P2转变为磷脂酰肌醇P3，后者募集并激活AKT。PTEN可以下调PtdlinsP3的浓度。从而抑制P13K／AKT途径。AKT对mTOR的激活主要通过以下两种方式：一种是磷酸化mTOR而直接激活它；另一种是磷酸化并抑制TSC1／TSC2二聚体。TSCl／TSC2是mTOR最重要的上游信号分子。Rheb是mTOR激活蛋白，TSCl／TSC2二聚体通过抑制Rheb阻止mTOR的活化。 由于P13K／Akt／mTOR通路分子发生突变或者上游信号通路分子激活，肿瘤细胞内P13／Akt／mTOR通路可被激活，从而使细胞增殖失控、凋亡抗拒以及引起细胞的代谢改变。 mTOR经过上述两种途径被活化后可将信号传递