实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离与定量重点分析.doc

实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离分析实验目的： 应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测 2、学习谱图和数据的处理方法实验原理：磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等, 被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中, 以促进动物的生长以及防治各种疾病, 如果不能严格控制停药期, 很容易造成在动物肉和组织中残留, 给人体健康带来危害, 因此世界各国对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量要求。GB/T 5009.116- 2003 用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量, 操作简单快速,但是该方法灵敏度比较低。实验仪器与试剂： 仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱 试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺吡啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合液，乙腈（AR），0.05%甲酸溶液0.05%甲酸溶磺胺嘧啶标准溶液磺胺吡啶标准溶液称取0.0g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至.0 mL，用0.45μm滤膜过滤0.45μm滤膜。磺胺嘧啶和磺胺吡啶1?mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10?mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5 mg/mL（500ppm）实验步骤：准备准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。0.05%甲酸溶液根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。配制样品1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤称取0.0g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至.0 mL，用0.45μm滤膜过滤0.45μm滤膜。磺胺嘧啶和磺胺吡啶1?mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10?mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5mg/mL（500ppm）。 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站）。波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键[Enter]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 , w4流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 更换流动相并排气泡将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 平衡系统按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开在线色谱工作站软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下数据收集页的 [查看基线] 按钮。等度洗脱方式 ; g5 J; Q按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。进样进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取。 表一：磺胺嘧啶 峰号 组分名 保留时间 面积 面积% 峰高 浓度 理论塔板 1 磺胺嘧啶 9.553 5688838.1 100.000 304837.7 0.00000 6354.168 图二：磺胺吡啶 表二：磺胺吡啶 峰号 组分名 保留时间 面积 面积% 峰高 理论塔板 1 磺胺吡啶 10.901 4904984.3 100.0000 248805.9 7437.090 图三：混合样 表三：混合样 峰