桑叶的生物活性成分药理成份产业化工艺路线.20140201重点分析.docVIP

6桑蚕资源的生物活性成分药理成份产业化工艺路线 6.1桑资源的生物活性成分药理成份产业化工艺路线 6.1.1桑枝总黄酮提取工艺优化 黄酮类化合物的生物活性。黄酮类化合物是药用植物的主要活性成分之一，具有广泛的生物活性。具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病以及抗衰老等作用。随着研究方法和技术的不断提高，发现黄酮类化合物还具有清除自由基、抗菌消炎、抗过敏、抗病毒、抗癌和提高免疫力等作用。 我国桑枝资源丰富，不管直接以桑枝作为药材而进行初级开发，还是以其为原料，用以中药制剂或者保健品的次级开发，或者用以天然药物产品的深度开发，桑枝均具有重大的综合利用价值。利用桑枝黄酮类化合物开发新药或者保健品，更具有广阔的应用前景。 (1)桑枝总黄酮提取工艺研究。本实验探讨了提取时间、乙醇浓度、料液质量浓度及温度对桑枝总黄酮提取效果的影响，在此基础上利用正交试验，采用极差和方差分析法确定了黄酮的最佳提取工艺条件：温度为80℃、料液质量浓度33g/L、乙醇浓度70﹪、浸提时间120min。在该条件下，其提取率可达1．01％。 (2)桑枝总黄酮的分离纯化研究。本试验探讨了聚酰胺分离纯化桑枝总黄酮的静态吸附和动态吸附两方面的技术参数，静态吸附上样量1：274g／g(净黄酮量：树脂量)、动态吸附上样量l：61g／g、上样浓度2．149mg／mL、吸附流速和解析流速均为lmL／min、吸附时间lh、70％乙醇作为洗脱剂。在此条件下黄酮的洗脱量可达92．29％。 (3) 桑枝中桑色素的分离纯化及检测。采用95％乙醇浸提，乙酸乙酯萃取，聚酰胺树脂吸附色谱法对桑色素进行分离纯化。结果表明，该方法可提取分离到高纯度的桑色素。薄层层析色谱法显示，以氯仿：甲醇：醋酸(15：5：2)作为展开剂，用1％硝酸铝醇溶液显色，可于波长为365nm的紫外灯下观察到桑色素显绿色荧光。用高效液相色谱作定性检测，结果表明，用symmetry@C-18(4．6x150mm) 色谱柱，以甲醇：水：磷酸(50：49．8：O．2)为流动相，流速为lmL／min，柱温30℃，在波长370nm处桑色素具有良好的色谱吸收峰。 （4）体外抗氧化活性研究。本试验以VE做对照，从清除自由基能力和还原能力两方面评价了芦丁、槲皮素、桑色素和桑枝总黄酮抗氧化能力。结果表明，槲皮素对DPPH·的清除能力最强，是VE的1．4倍，桑色素和桑枝总黄酮的清除能力相近且弱于槲皮素，芦丁清除能力最弱；在0．02-0．08mg／mL范围内，槲皮素的还原能力最强，桑色素和桑枝总黄酮与VE的还原能力相近，且弱于槲皮素，芦丁的还原能力最弱。 （5）不同品种桑枝总黄酮含量比较。本试验对本校桑树种质资源圃中保存的几种生产上广泛种植的栽培品种的桑枝总黄酮含量进行了测定比较，结果显示， 不同品种之间桑枝总黄酮含量差异较大。 一、研究内容 (1)研究xx桑树种质资源圃中嘉陵20号的桑枝为材料，选择提取时间、乙醇浓度、料液质量浓度及温度对桑枝总黄酮提取效果进行了单因素实验，在此基础上利用正交实验，采用极差和方差分析法确定了桑枝黄酮的最佳提取工艺条件。 (2)以聚酰胺为材料，通过静态和动态吸附实验，研究了聚酰胺分离纯化桑枝总黄酮的最佳技术参数。 (3)采用95％乙醇浸提，有机溶剂萃取，聚酰胺树脂吸附色谱法对桑色素进行分离纯化，用薄层层析色谱与高效液相色谱相结合的方式进行定性分析，确定了分离纯化及鉴定桑色素的技术路线和方法。 (4)以VE做对照，从清除自由基能力和还原能力两方面评价了芦丁、槲皮素、桑色素和桑枝总黄酮的抗氧化能力。 (5)利用NaN02-Al(N03)3-NaOH分光光度法测定了广泛种植的几种桑树栽培品种桑枝总黄酮含量并比较了其差异性。 二、桑枝总黄酮提取工艺优化 利用实验室的常用的仪器设备条件对人工三倍体嘉陵20桑枝黄酮进行粗体工艺优化，技术路线如下： 桑枝总黄酮提取工艺优化 6.1.2 桑叶黄酮提取纯化工艺及对尿酸代谢的影响 一 、桑叶黄酮是其中主要的生物活性成分，药理学研究表明：桑叶黄酮具有调节α-葡萄糖苷酶、降血糖、抗肿瘤等药理活性。而且黄酮类化合物对高尿酸血症有效。为深度利用资源，本文对黄酮的提取分离技术进行了工艺研究，并后研究了桑叶黄酮对高尿酸血症模型的降尿酸的作用。研究通过高压液相色谱法对桑叶黄酮类化合物进行成分分析，结果表明，其主要成分为芦丁，杨梅素，槲皮素，山奈素等。采用正交试验法对提取桑叶黄酮的工艺进行优化，结果表明，最佳的浸提条件为：在80℃下70％乙醇回流提取2次，每次1．5h，料液比为1：2 0(w／v)。为得到纯度较高的桑叶总黄酮，采用大孔树脂吸附法进行黄酮纯化，以桑叶总黄酮的得率和纯度为指标，比较了五种大孔树脂的吸附性能，结果显示HPD826大孔树脂对桑叶总黄酮吸附性能最好；进一步采用正交试