实验一苦参生物碱的提取分离与鉴定重点分析.docVIP

实验一??苦参生物碱的提取分离与鉴定 ? 苦参是豆科槐属植物苦参的干燥根，含有多种生物碱，总碱含量高达约1%，其中以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。苦参碱可溶于水、乙醚、三氯甲烷、苯，难溶于石油醚。氧化苦参碱为白色柱状结晶，可溶于水、三氯甲烷、乙醇‘难溶于乙醚、石油醚。现代药理学研究表明，苦参中的生物碱具有消肿利尿、抗肿瘤和抗心律失常的作用。 ? 一、实验目的? 本实验通过从苦参中提取苦参生物碱，考察盐酸的浓度和渗漉速度对提取产率的影响? 了解化学反应萃取分离在天然药物提取过程中的应用? 掌握渗漉法和离子交换提取生物碱的原理、方法与工艺过程，并熟悉用柱层析法分离生物碱。 ?? 二、实验内容? （1）苦参总碱的提取。? ①?将苦参粗粉用不同浓度的HCl溶液润湿后渗漉，收集渗漉液； ②?将收集的渗漉液通过阳离子交换树脂柱，进行离子交换；? ③?洗脱并回流提 取苦参总碱。? （2）分别用柱层析法和溶解度差异法分离氧化苦参碱。? ? 三、实验时间? 四、实验原理? 1.提取与分离方法? 利用苦参生物碱具有弱碱性，可与强酸结合成易溶于水的盐的性质，将总碱从药材中提取出来。结合动态连接提取工艺过程，实现生物碱充分溶出。然后，加碱碱化，即可得到苦参生物总碱。以苦参碱为例：? ?????? 2.?工艺流程? ?? ????????????? 实验材料与设备 实验设备与仪器:层析柱，渗漉桶，烧杯，布氏漏斗，医用搪瓷盘，恒温水浴箱，层析槽，索氏提取器，研钵。 实验材料与试剂:苦参，强酸性阳离子树脂，层析用氧化铝，三氯甲烷，甲醇，浓氨水，乙醚，碘化铋钾，盐酸，氢氧化钠。 碘-碘化钾试剂，碘化汞钾试剂，碘化铋钾试剂，硅钨酸试剂。 实验步骤 反应提取步骤 （1）动态连续提取 ① 取苦参粗粉200g加一定浓度的盐酸，拌匀，放置30min,使生药膨胀。 ② 然后装入渗漉桶中，边加边压，层层加紧，全部装完后，药面压平，盖一层滤纸，滤纸上压一些洗净的玻璃塞。 ③?加入一定浓度的HCl溶液经过药面，以4~5mL/min的速度渗漉，收集渗漉液至无明显的生物碱反应为止，收集渗漉液约2500mL。? （2）交换? ①?将收集的渗漉液置于阳离子交换树脂进行交换，如交换液有为交换的生物碱时，仍可以继续交换，直至流出液无生物碱反应为止。? ②?将树脂倾入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，除去杂质，于布氏漏斗中抽干，倒入唐磁盘中晾干。? （3）总生物碱的洗脱? ①?将晾干的树脂，加浓氨水适量，搅匀，使湿润度适宜，树脂充分膨胀，盖好放置20min。? ②?装入索氏提取器中，加三氯甲烷300mL在水浴上回流洗脱，提至尽生物碱为止。? ③?回收三氯甲烷，得棕色粘稠物。 ④?加无水丙酮适量，加热溶解，过滤，减压蒸干。? 必要时重复此操作，以脱除粗生物碱中的水，再在无水丙酮中重结晶。? 2．氧化苦参的分离? （1）柱色谱法??取100目色谱用氧化铝50g，用漏斗缓慢加入色谱柱内（1cm×24cm，干法装柱），取苦参0.2g，加入适量氧化铝，搅匀，研细，装入色谱柱顶端，先用50ml三氯甲烷通过色谱柱，再用三氯甲烷-甲醇（9:1）洗脱，流速为1mL/min。每10mL为一份（约收集15份），经薄层层色谱鉴定，相同流出成分合并，在水浴上挥发去溶剂，剩余物加无水丙酮溶解，放置，析出结晶为氧化苦参碱。? （2）溶解度差异法??将苦参总碱溶于少量三氯甲烷中，加入10倍量乙醚，放置后有沉淀析出，过滤吸出的沉淀，滤液浓缩后再溶于少量三氯甲烷中，加入乙醚放置，再过滤析出沉淀，合并两次的沉淀物，用丙酮重结晶，即为氧化苦参碱。? （3）实验要求??上述本工艺实验的操作步骤为典型实例，实验过程要求改变盐酸浓度以及渗漉速度，其余条件不变，在进行本实验时有两组同学做同一组浓度，但渗漉速度不同，以此比较不同盐酸浓度、不同渗漉速度下的提取率差异。 3.?薄层色谱鉴定? 样品：苦参总碱、氧化苦参碱、苦参碱标准品、氧化苦参碱标准品?（1）吸附剂：硅胶G；展开剂：三氯甲烷-甲醇-浓氨水（5:0.6:0.2）；?（2）吸附剂：氧化铝；展开剂：三氯甲烷-甲醇-乙醚（44:0.6:3）；?（3）显色剂：改良碘化铋钾。?4.沉淀试验? 取苦参总碱少许溶于稀盐酸中，分置4个小试管中，分别滴加下列试剂1~2滴，观察现象：? 碘-碘化钾试剂?碘化汞钾试剂?碘化铋钾试剂?硅钨酸试剂 七、注意事项? （1）浓盐酸、氨水均具有刺激性，使用时注意通风。? （2）丙酮、三氯甲烷、甲醇、无水乙醇和乙醚均为易燃品，注意防火安全。?（3）在将药材装柱时，不要将药材塞得过紧或过松。过紧，渗漉速度太慢；过松，渗漉速度太快，达不到渗漉效果。 八、实验报告内容? 实验现象记录?