液谱向文胜重点分析.pptVIP

手动进样器 进样阀手柄有两个旋转位置。一个进样位置是用虚线表示的流路连通，泵输送流动相进入色谱柱，由注射器注入样品溶液保留在定量管中；另一个分析位置是用直线表示的流路接通，泵输送流动相通过定量管将样品带入色谱柱。进样方式有手动和自动进样两种。 到柱子 接泵 定量管 六通阀进样示意图 三、色谱分离系统 1. 色谱柱及其填充 色谱柱由柱管和固定相构成。柱管多用不锈钢制成，要求耐高压、管内壁有很高的光洁度。常用柱管内径为2~6mm，长度为15~50cm。 高效液相色谱柱的装填比气相色谱柱要严格，用二氧六环和四氯化碳不同密度的混合液作为匀浆剂，将填料调成匀浆，经超声波处理使其高度分散。用高压泵以400 MPa/cm2以上的压力将填料顶入色谱柱中。 在液相色谱中，人们习惯把内径大约4~5mm的色谱柱称为普通“分析”柱，内径大于 8mm的称为半制备或制备柱。而内径在 2mm 上下的被称为“窄”柱 (Narrow Bore) 内径小于1mm的称为“微径”柱 (Micro Bore)。内径小的色谱柱相对更省溶剂，相对灵敏度更高。 2. 柱恒温器 柱温是液相色谱的重要操作参数。高精度的温度控制对保证色谱柱性能，进行高精度、高重现性的分析是比不可少的。在较高柱温下操作有三个好处：①能增加样品在流动相中的溶解度，缩短分析时间。②能改善传质过程，减少传质阻力，增加柱效。③能降低流动相粘度，在相同流量下，柱压力降低。 色谱柱及恒温箱 四、检测器 1.紫外-可见光检测器 是高效液相色谱中应用最广的检测器，它对许多样品具有高的灵敏度，最小检测量可达10-9 g，（线性范围宽约为10 - 4）。 2.荧光检测器 属选择性检测器，用于测定能发出荧光的物质。 3. 示差折光检测器 属通用型检测器，是利用纯流动相与含有被测组分的流动相之间折射率的差别进行检测。凡具有与流动相折射率不同的组分，均可适用这种检测器。 4. 二极管阵列检测器 是一种新型检测器相当于紫外-可见光检测器，进入流动池的不是单色光，得到的信号是在所有波长上的三维色谱光谱信号。用以判别色谱分离的状况及强化定量和定性分析。 §9~4 高效液相色谱固定相 1.薄壳型或表面多孔型固定相 是一种具有实心硬核（一般是玻璃）的多孔层微球。玻璃核的外面包了一层很薄的（约1~2μm）有空隙结构的多孔材料，微球直径约为30 μm。 高效液相色谱固定相分三种类型： 2.全多孔型固定相 是大小均匀的全孔硅胶，直径5~10μm。理论塔板数可达5 ~ 10万/米。这种填料除能涂渍固定液，还可化学键合上具有不同作用基团的固定液。 3.多孔聚合物固定相 是指不同类型合成树脂填料，应用广泛的是聚苯乙烯和二乙烯基苯交联而成的聚苯乙烯凝胶。这种填料能直接用于分配色谱，还可通过引入离子交换基团用于离子交换色谱。 是指吸附活性强弱不同的吸附剂，主要为硅胶基质，氧化铝，此外还有氧化镁、分子筛、聚丙烯酰胺、活性炭等。 用硅胶和氧化铝做固定相应注意几点：⑴酸性化合物、不饱和化合物及卤素化合物易吸附于氧化铝；⑵中度碱性化合物易吸附于硅胶； ⑶对酸敏感而易分解的化合物应在氧化铝上作色谱分离； ⑷对碱敏感而易分解的化合物应在硅胶上作色谱分离。 一、液-固吸附色谱固定相 是在载体上涂渍一层固定液。依据结合方式分为： 1.涂渍固定相 液-液色谱的固定相有类似于气相色谱的涂渍固定相，只是粒度小于气相色谱固定相。载体主要是多孔型硅珠。 常用固定液有β ， β′-氧二丙睛、聚乙二醇、 角鲨烷等。缺点是固定液容易流失，稳定性和重复性不易保证。 二、液-液分配色谱固定相 2.化学键合固定相 兼有吸附和分配色谱两种机理。优点是: ⑴表面键合了有机物基团，消除了表面的吸附活性点，使表面更均一；⑵通过改变键合有机分子的各种不同基团来改变选择性；⑶柱效高；⑷固定液不流失；⑸化学键的牢固，有利于梯度淋洗和样品回收。 化学键合固定相是以硅珠为基质，用化学反应的方法将有机官能团通过化学键结合到硅珠表面的硅醇基团上。 官能团有：非极性－－烷基。如：C18、C8(ODS), -Si-O- Si-(CH2)17 –CH3 极性－－氨基、氰基 -Si-O- Si-(CH2)3 –NH2 ,分离含氢键的化合物 -Si-O- Si-(CH2)3 –CN, 分离离子化合物 是在载体上涂渍或化学键合上阳离子或阴离子交换树脂。 离子交换剂类型: ⑴以硅胶或玻璃球为基质，表面涂一层离子交换树脂，或将离子