2010年版微生物限度检查法及应用指导原则的解说.ppt

2010年版《中国药典》微生物限度检查法及应用指导原则介绍 2010.5 内容提要 1、起草的指导思想 2、增、修订内容主要内容 3、药品微生物检测工作展望 起草的指导思想 微生物限度检查法： 1、基本维持2005年版检查法的体系（检查项目、检查方法、培养基、试验菌、结果判断等）。 2、完善检查法、 增加试验的可操作性、 使方法更具科学性，保证检验、结果的准确性。 3、增、修订内容: 尊重科学，以试验为基础。 起草的指导思想 微生物限度检查法应用指导原则 ： 为更好应用微生物限度检查法（附录ⅩⅢC），特制定本指导原则。 对标准和方法中的特定内容及标准的应用做进一步的说明。 微生物限度检查法应用指导原则 主要说明的内容有（P219） （1）微生物限度检查法适用范围的说明 （2）关于表面活性剂、灭活剂及中和剂的说明 （3）方法选择的原则及离心沉淀法的说明 （4）对照培养基概念、用途及分发 （5)对“无法消除抑菌作用”情况的说明 (6)控制菌检查确证方法的选择原则 （7)微生物限度标准如何制定和执行？ (8)化学药制剂微生物限度检查如何执行？ (9)如何确定一个药品的微生物检测项目？ (10)制定药品的微生物限度标准的依据。 药品微生物实验室规范 指导原则（P219） 用于指导微生物检验实验室的质量控制 1、人员的要求 2、培养基的制备及贮存 3、菌种的制备存放管理 4、实验室的布局和运行 5、实验室设备 6、文件及实验记录 7、结果的判断 增、修订内容（1）-总则 增、修订内容（2）-检验量 1、要求检查沙门菌的供试品：其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。 增、修订内容（3）-供试液制备 检查法中供试液制备： 1、离心沉淀法 500转/分钟离心3分钟，取全部上清混合。 用于细菌检查。主要去除大颗粒沉淀物。 指导原则对供试液制备等方法的说明：微生物限度检查法应用指导原则1.ppt 增、修订内容（3）-贴剂供试液制备P108 1、去掉保护层 2、用无菌的多孔材料覆盖粘贴面 3、置含有表面活性剂的稀释剂中 4、震荡至少30分钟 5、也可采用其他适宜的方法 对2005版难以检查的贴剂进行了详细的描述，但实际检验中不能仅限于此。 增、修订内容（3）-供试液制备 1、供试品检查时表面活性剂应证明对微生物生长和存活无毒性，也就是说试验所使用的任何有可能影响微生物活性的添加试剂均需要验证，即使是药典允许使用的试剂也应对使用量进行验证（含碘类样品使用硫代硫酸钠中和的量） 2、供试品溶液的制备需加热时，可采用经过验证的方法，但加热应均匀，温度不应超过45℃ 增、修订内容（4）-细菌、霉菌 及酵母菌计数 1、增加“计数培养基的适用性检查” （1）培养基种类：成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查； （2）菌种：同2005年版计数方法的验证用菌种（5种5代），明确了干燥菌种为0代。 （3）菌液制备：黑曲霉稀释液由0.9%无菌氯化钠溶液 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱孢子 增、修订内容（4）-细菌、霉菌 及酵母菌计数 （4）菌液使用时间： 菌悬液制备后室温放置应在2小时内使用， 若保存在2 ～ 8℃的菌悬液可以在24小时内使用。 黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在2 ～ 8℃，在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用； （5）检查方法及结果判断：按培养基种类用相应的试验菌采用平皿浇注法与对应的对照培养基比较，菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。—说明：微生物限度检查法应用指导原则1.ppt 增、修订内容（4）-细菌、霉菌 及酵母菌计数 2、计数方法的验证中增加“常见干扰物的中和剂或灭活方法 ” 增、修订内容（4）-细菌、霉菌 及酵母菌计数 3、增加了“没有办法消除供试品中的抑菌作用 的情况及相关规定” 若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用，那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。然而，供试品也可能仅对试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前