12第二章石蜡制片1-9节讲解.pptVIP

石蜡切片，用旋转切片机。一个旋转切片机，可分三个部分， 1.安装切片刀的部分，有调节刀片斜度和固着刀片的螺旋。 2.安装材料的部分，也有螺旋可以调节材料的位置。 3.操纵在旋转中向前推进的部分，控制切片的厚薄。 二、切片机 三、切片步骤 1．先将冷凝的蜡块,切成小块,粘固在小木头上。2．安装切片刀,刀的斜度,非常重要,最好先切除的蜡块试刀,以 确定刀的斜度(5-8度),一经调度适合后,就不要随便变动, 以免每次试刀的麻烦。 A. 倾斜角过小,损坏材料的表面 B. 倾斜角过大,材料变形 3．修整蜡块,刀片斜度调好后,将刀片移近蜡块,使小蜡块的下边 与刀锋平行,然后把它固定,再转下蜡块,呈矩形。只有平 整的蜡块,才能切出平整的蜡带。4．根据需要调整厚度计,一般石蜡切片以5-12微米厚度最为适 宜。调度后,把它固定下来。 5. 进行切片,将切出的蜡带,平展于盒内以供粘片。 三、影响切片质量的因素 1. 蜡片卷曲，主要由于： A、切片刀不锋利 B、切片刀的角度不正确 C、切片太薄或太厚 D、石蜡太软或太硬 E、蜡块中的材料不在中央 2. 材料与蜡片分离是因为包埋时，石蜡温度与材料温度不一致； 3. 蜡片上有条纹，是因为切片刀上有缺刻； 4. 蜡带不成直线，是因为蜡块上下不平整； 5. 蜡片破碎不成蜡带而吸附于切片刀上，是由于材料过脆与刀口摩擦产生静电。 第八节 粘片和粘片剂 切好的蜡带镜检合格后，即可用粘贴剂将蜡片粘贴在载玻片上固定，这个步骤称为“粘片”。 一、郝伯特粘贴剂：植物制片中最常用的粘贴剂 溶液甲: 动物胶(明胶) 1g 蒸馏水 100ml 甘油 15ml 石炭酸(结晶) 2g 溶液乙: 甲醛 2g 蒸馏水 100ml 粘片步骤：1.在擦净的载玻片上滴上一小滴溶液甲，涂匀， 2.加上1～2滴溶液乙，将蜡片放在液面上， 3.载玻片放在烤片台上(36℃左右),蜡片受热后慢慢伸平 4.待完全伸平后，吸取多余的水，烤干后放入切片盒中， 5.用37℃左右的温箱再行烘干或放室内自干。 三、火棉胶粘贴剂 用于厚切片的粘贴， - 木材、种子等切片用普通粘贴剂,染色时往往易脱落， - 经火棉胶粘贴剂粘附后，切片染色时不脱落。 二、蛋白粘贴剂 配方：新鲜鸡蛋白 25ml 甘油 25ml 石炭酸 0.5g 用法：用蛋白与甘油搅拌，同时加入石炭酸，调匀过滤，应用 时以滤液15滴，放入纯水50毫升中即得。 第九节 脱 蜡 意义：玻片烘干后，须将蜡脱，才能染色， 步骤：用二甲苯，再经酒精入水中，而后染色，其顺序如下： 二甲苯→1/2二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％ 酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→水→染色 以上各级约需5～10分钟。 脱蜡 脱腊 透明(置换) 脱水 未脱蜡 脱蜡 固定液对组织的渗透速度 固定剂 单位时间内渗入距离（毫米） 1小时 4小时 12小时 26小时 FAA液 2 3 6 8 佛莱明氏液 1 2 4.5 5 1%苦味酸 0.5 1 1.5 1.5 0.5%锇酸 0.25 0.75 1 1 1%铬酸 0.5 1.5 2.5 4 10%甲醛 0.5 2 2.5 5 70%酒精 0.5 1.25 2.5 8 90%酒精 1 1.75 3.5 8 5%醋酸 1 2.5 4 8 （1）固定液中冰醋酸和甲醛的比例，经常是根据材料而略加改变：容易引起收缩的材料则宜多加冰醋酸而减少甲醛的含量，坚硬的材料可略减少冰醋酸而增加甲醛。 （2）幼嫩材料用低度酒精(50%)代替70%酒精，以防止材料收缩。 （3）制片时，材料不必洗涤，直接入70%酒精进行处理。 （4）可加入5ml甘油（丙三醇），以防固定液蒸发和材料变硬。 注意： 酒 精: 强还原剂,渗透力强,材料收缩,组织过度硬化, 甲 醛: 强还原剂,渗透慢,材料收缩,缓解材料过度硬化, 醋 酸: 渗透力强,材料膨胀,缓解材料过度硬化, 主要成分: 纯酒精和冰醋酸，有时还加入氯仿、氯化汞等化学药剂 特 点: 渗透非常迅速，常作为动植物组织及细胞的固定。 a.卡诺氏(carnoy)固定液 甲法： 纯酒精 15ml 冰醋酸 5ml 乙法： 纯酒精 30ml 冰醋酸 5ml 氯仿 15ml 适用范围: 穿透力大、迅速，常用于细胞学如根尖、花药的压片及子 房石蜡切片等 固定时间: 需要的固定时间很短，如根尖只需15-20分钟，其他材