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肉汤发酵液中糖类、醇类和二元醇类的测定 摘要：本文建立了一种采用离子色谱法，安培检测器测定肉汤发酵液中的糖类、糖醇、醇类和二元醇类的方法。选择的色谱条件为：CarboPacMA1和CarboPacTMPA1糖阴离子交换柱，高浓度的氢氧化钠溶液等度淋洗和梯度淋洗，安培检测器检测。该方法检测限（S/N=3）为 0.2-7000 ng，线形相关系数R2大于0.998，线性范围为4个数量级，峰面积的相对标准偏差为2-7%，保留时间的相对标准偏差为0.2-0.4%，可以用于具体定量。 关键词：离子色谱 CarboPacMA1 CarboPacTMPA1 肉汤发酵液 肉汤发酵液是养料、副产物、细胞、细胞碎片和目标产物的复杂混合物。这些成分中的很大一部分不能通过吸收法来检测。高效阴离子交换色谱技术能够分离碳水化合物的复杂混合物，如肉汤发酵液等。高效阴离子交换色谱的高分辨能力和脉冲安培法的选择性使得碳水化合物、二元醇、醛醇和其他醇类（如甲醇和乙醇）的同时测定成为可能，而且其他发酵成分干扰很少[1-3]。此套装置具有很强的分析能力，可以通过一套仪器和色谱方法同时检测大批量的不同化合物，无需衍生。 本文描述了两种不同的阴离子交换分析柱和安培检测器联用分析酵母和发酵液中简单的糖类、醛醇、醇类和二元醇类的方法。体系中有包含的的无机和有机阴离子，可以被IonPac AS11和AS11-HC阴离子交换柱分离而后通过抑制电导法检测[4]。 本文比较了CarboPac TMPA1 和CarboPac MA1两种柱子分析糖类、糖醇、醇类和二元醇类的选择性。本文报道了DX-500 BioLC系统与脉冲安培检测联用（CarboPac MA1柱分离）方法的检测限、线性范围、选择性和精密度。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Dionex DX-500 BioLC色谱装置，包括：GP40梯度泵，带真空脱气装置；LC30或LC25柱温箱；ED40电化学检测器；AS3500自动进样器；PeakNet 色谱工作站 氢氧化钠，50%w/w，Fisher和J T Baker；去离子水，电阻大于等于18 MΩ-cm；D-阿拉伯糖，无水；L-阿拉伯醇；2，3－丁二醇；D-纤维二糖；2-脱氧－D－葡萄糖；赤藓醇；乙醇；D－果糖，参考级；海藻糖，参考级；半乳糖醇，参考级；D-半乳糖，参考级；半乳糖胺，参考级；D-葡萄糖胺，参考级；β－D－葡萄糖，参考级；丙三醇；α－乳糖，单水合物；麦芽糖，单水合物，参考级；麦芽糖醇；麦芽三糖水合物；甘露醇，ACS级；甲醇； 棉子糖，五水合物，参考级；L-鼠李糖，单水合物；D-核糖，参考级；核糖醇，参考级；山 梨醇；蔗糖；α－α－海藻糖，二水合物，参考级；D-木糖，无水合物。 1.2色谱条件 CarboPac MA1方法： 柱 子：CarboPac MA1分析柱（P/N 44066）；CarboPac MA1保护柱（P/N 44067） 淋洗液：A：480mM NaOH；流 速：0.4 ml/min 程 序： 等度淋洗（0-70.min，100%A） CarboPac PA1方法： 柱 子：CarboPac PA1分析柱（P/N 35391）；CarboPac PA1保护柱（P/N 43096） 淋洗液：A: 水；B: 100mM NaOH；C: 250mM NaOH，流 速：1.0 ml/min 程 序： 两种方法通用的条件： 进样体积：10uL；温度：30℃；检测器（ED40）：积分安培，金工作电极 波形选择：时间（s） 电位（V） 积分 图1～2表明，CarboPac MA1 柱和CarboPac PA1柱具有不同的选择性，因此，在测定 发酵液中的醇类和糖类化合物时具有不同的强度。柱的选择与分析物的种类、浓度和期望的 分析时间有关。 图1 CarboPac MA1柱分离和积分安培检测发酵肉汤中常见的糖类、醛醇、醇类和二元醇  图2 CarboPac PA1柱分离发酵肉汤中常见的糖类、醛醇、醇类和二元醇 2 结论: 上述结果表明高效阴离子交换色谱和脉冲安培检测法能分析酵母和细菌发酵液中的糖 类化合物。CarboPac MA1 和CarboPac PA1这两种柱子均适于分析发酵液中的糖类、乙醇、 醛醇和二元醇。MA1柱能更好的分离早淋洗出的化合物如乙醇、二元醇、醛醇和单糖类， 对于较复杂的糖类化合物如三糖等淋洗时间较长。PA1柱能快速有效的分离双糖和三糖。糖 类化合物和醛醇的复杂混合物能被同时检测，为优化发酵过程提供信息。 参考文献 [1] Robinett RSR, Herber WK. J. Chromatogr. A, 1994, 671, 315-322. [2] Herber WK, Robinett R