尼古丁对血管内皮细胞表达间粘附分子-1及其基因转录调控与信号转导的影响.pdf

!里坠塑垦型查堂堕主竺丝苎 三 ，7本工作的主要结果如下： 1．观察到尼古丁可促使中性粒细胞与内皮细胞的粘附。 杂交的方法检测ICAM—lmRNA表达，观察到尼古丁可分别促进两者的表达，且 呈时间和剂量依赖的趋势。以上结果表明尼古丁在基因转录水平诱导ICAM—l 表达。 3．成功地构建了四种含人IcAM一1基因不同长度的启动子序列和两种含顺式 作用元件发生定点突变序列的荧光素酶报告基因质粒，为研究尼古丁及其他因 素诱导ICAM一1基因表达的转录调控机制奠定了基础。 4．用真核细胞转染技术分别将四种含人IcAM一1基因不同长度启动子序列 的报告基因质粒导入人脐静脉内皮细胞，然后用尼古丁刺激转染的内皮细胞， 序列的报告基因质粒表达荧光素酶，而含有一134／+36序列的报告基因质粒对尼 古丁诱导无反应，表明尼古丁诱导ICAM一1基因表达依赖于启动子中一230bp和 一134bp之间的序列。 5．IcAM一1基因启动予中的顺式作用元件下游NF—K B结合位点和sp一1结 合位点分别位于一230bp和一134bp之间。将两种含有下游NF—KB结合位点和Sp—l 结合位点发生定点突变序列的报告基因质粒转染内皮细胞及用尼古丁诱导，观 察到尼古丁可促使含有IcAM一1启动子中Sp—l结合位点发生定点突变序列的报 告基因质粒表达荧光素酶，而含有中NF—x B结合位点发生定点突变序列的报 告基因质粒对尼古丁诱导无明显反应，提示尼古丁诱导ICAM一1基因表达依赖 于其启动子中的顺式作用元件NF—KB结合位点。 6．用激光共聚焦显微镜观察到尼古丁可促使内皮细胞胞内游离钙离子浓度 ([ca”]i)的增加，钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应。 7．用Y一“P—ATP掺入法检测PKC活性，观察到尼古丁可引起内皮细胞的PKC 活化。 ±里堡塑堕型查兰竖圭兰堡壅——1 法检测Ras蛋白，观察到尼古丁可引起内皮细胞Ras蛋白的活化a 9．利用上述方法观察到764—3可分别抑制尼古丁诱导的中性粒细胞与内皮 细胞的粘附增加、内皮细胞ICAM—l蛋白和mRNA表达增加、内皮细胞胞浆游离 钙离子浓度的增加以及PKC的活化。 综上所述少，本工作首次观察到尼古丁可促进中性粒细胞与原代培养的人脐 0 静脉内皮细胞的粘附、增加内皮细胞IcAM一1蛋白和mRNA表达：首次构建了一 系列含人IcA~l—l基因启动子区不同长度以及下游NF—KB和sp一1结合位点发 生定点突变序列的荧光素酶报告基因质粒，并首次提出IcAM一1基因上的尼古 丁诱导反应元件与下游NF—xB结合位点有关；观察到尼古丁可分别引起内皮 细胞胞浆游离钙离子浓度的增加以及PKc和Ras蛋白的活化；中药丹参的提取 物764—3可在多个方面影响尼古丁的作用。 主里垃塑堕型查兰竖主兰堡奎——! Abstract inthe ofsome isoneofthe riskfactors smoking major pathogenesis cigarette suchas c11ronicobstmctiVe diseaseand diseases innamatory pulmonary ofsuch disease mechanisms vascular atherosclerotic ．Howe