项目九血清学试验材料.ppt

抗体产生的一般规律 抗体产生规律可分为初次应答和再次应答 初次应答：潜伏期长，效价低，持续时间短，免疫作用不强 再次应答：潜伏期短，抗体产生量大，维持时间长 抗体产生的一般规律 血清学试验 定义：是指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应 试验材料：含有抗体的血清；抗原物质 原理：抗原和抗体具有高度特异性 血清学试验的一般特点 特异性 可逆性 比例性 阶段性 稳定性 特异性 特异性是指任何一种抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗体发生反应。 因为抗体CDR与抗原决定簇在化学结构和空间构型上呈互补关系。 这种高度的特异性在传染病的诊断、防治等医学和生物学领域都已得到了广泛的应用。 大多数天然抗原物质的构成复杂，常含有多种抗原决定簇。如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，则可与彼此相应的抗血清出现交叉反应（cross reaction）。 可逆性 可逆性是指在一定条件（如低pH、高浓度盐等）下，抗原抗体复合物分子间作用力减弱而导致解离，回复到抗原与抗体的游离状态。 抗原抗体反应遵循生物大分子热动力学反应原则，其反应式为： 抗原抗体反应平衡取决于两个因素，一是抗原抗体亲合力大小；二是环境因素对复合物的影响。 比例性 比例性是指多价抗原与抗体反应，只有当二者浓度比例适当时，才形成大的抗原抗体结合物，产生凝集、沉淀等可见反应。 把最迅速出现可见反应时的抗原抗体的浓度比或量比，称为抗原抗体反应的等价点（equivalence point），抗原与抗体比例最合适的范围称等价带（equivalencezone）。 Marrack提出的网格学说解释了抗原抗体反应比例性的机制。 网格学说 当多价抗原与多价抗体在等价带结合时，相互交叉连接成具有立体结构的网格状复合体，形成肉眼可见的沉淀物。 当抗原或抗体过剩时，由于过剩方的结合价得不到饱和，只能形成较小复合物，不能出现可见反应。 通常在血清学试验中，以8.5g/LNaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。 一、反应物自身因素 抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 抗原的理化性状、抗原决定簇的数目和种类均可影响血清学反应结果 例如，可溶性抗原与相应抗体反应出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反应则出现凝集 1、抗原 抗体是血清学反应中的关键因素，对反应的影响表现在以下三个方面: (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物 2、抗体 (2)特异性与亲和力: 特异性和亲和力是影响血清学反应的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。 （3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 二、环境因素 l.电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。 * 信阳农业高等专科学校生物技术系 * 免疫学 陈功轩 项目九 血清学试验 一、抗原(Antigen，Ag)? 能刺激机体产生特异性免疫应答，且能与其免疫应答产物(抗体或致敏淋巴细胞) 在体内或者体外结合，并发生一系列生物学效应的物质。 T细胞 B细胞 Ag T B T 浆细胞 致敏T细胞 抗体 （一）抗原的两种基本特性 1.免疫原性 指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。 Ag T B T 浆细胞 致敏T细胞 抗体 2.抗原性(又称免疫反应性) 指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)发生特异性结合的性质。 Ag T B T 浆细胞 致敏T细胞 抗体 1.抗原本身的理化性质 2.抗原与机体的相互作用（免疫方式） （1）异物性:非己的异物 异种物质: 病原微生物、异种蛋白、药物 种系关系相差越远，免疫原性越强 同种异体: 血型抗原、血清蛋白 自身物质: 精子、晶状体蛋白等 （2