干燥综合征唇腺水分子通道蛋白-5表达研究.pdfVIP

干燥综合征唇腺水分子通道蛋白．5 表达的研究 中文摘要 背景 干燥综合征(sj59ren’Ssyndrome，SS)是以口干、眼干为主要临 床表现的一组病因不明的自身免疫性疾病。近年来的研究指出，干燥 综合征口眼干燥的症状至少部分是由支配泪腺和涎腺的自主神经系 统的神经传导功能受抑制所引起的，而不是象过去认为的那样完全由 T淋巴细胞在泪腺和涎腺中的侵润和对腺体的破坏作用导致腺体功 能减低所致。研究发现，即使完全无唾液分泌的患者，活检仍可见部 分形态正常的腺泡残存，在腺体的破坏程度和腺体的分泌功能之间并 不能建立起明确的对应关系。因此，近年来对干燥综合征发病机制的 研究，逐渐从引起外分泌腺组织损伤的各种因素转移到光镜下形态正 常的腺体细胞的功能损伤上。 目前，自主神经系统对外分泌腺的调控异常，在干燥综合征发 病机制中的作用，已有一定研究进展，尚有待进一步探索。而近年来， 分布在涎腺分泌细胞表面、对水分子具有高通透性的水分子通道蛋白 ．5(AQP5)，作为自主神经系统调控涎腺过程中的效应蛋白，逐渐引 起了干燥综合征发病机制研究领域的兴趣。 自1987年发现水分子通道蛋白．1(AQPl)以来，对其病理生理 功能的研究主要集中在肾脏、呼吸道、中枢神经系统和眼等结构。1999 年Ma等证实涎腺中的AQP5蛋白与唾液流率有显著相关。关于AQP 蛋白在干燥综合征发病机制中的研究最早见于2000年Moore等人的 报道中。后续研究则主要集中在AQP5蛋自在涎腺中的分布及腺泡细 胞内的转运异常，应用免疫组化或免疫荧光染色，进行定量分析。但 在于燥综合征患者涎腺分泌细胞中，AQP5蛋白的亚细胞分布及细胞 内转运是否存在异常尚有争议。 目前，国内外尚无对干燥综合征患者涎腺中AQP5在mRNA和 篮白表达水平上的研究。本实验希望结合临床指标，对干燥综合征患 者唇腺中AQP5的表达进行研究。 目的 研究干燥综合征患者唇腺中水分子通道蛋自．5在mRNA表达水 平和蛋白表达水平上的改变，分析AQP5在干燥综合征发病机制中的 可能作用。 方法 收集干燥综合征和对照组(包括非结缔组织病患者13例和无干 燥综合征的结缔组织病患者7例)的唇腺活检标本。 带和GAPDH条带的光密度比值。对ss组和对照组的结果比较， 并与临床检验结果进行相关性分析。 2．继续提取唇腺组织中的总蛋白，SDS．PAGE凝胶电泳分离唇腺总 蛋白后，电转印至硝酸纤维素膜上，先后与亲合纯化的山羊抗人 AOP5抗体、辣根酶标记兔抗山羊IgG抗体反应，ECL化学发光 法测定AOP5蛋白条带的光密度值，计算其与相同实验条件下所 得参照蛋白中AQP5条带光密度值的比值。 3．利用亲合纯化的山羊抗人AQP5抗体，将唇腺组织切片进行免疫 组化染色，设定腺泡腔面棕色颗粒沉积超过50％腺泡腔切面面积 者为阳性腺泡，随机计数100～llO个腺泡，计算阳性腺泡率。同 时计数切片中的淋巴细胞侵润灶，镜下观察测定组织的切面面积， 从而计算出唇腺组织的淋巴细胞侵润灶评分。 and Product 4．使用统计产品与服务解决方案(StatisticalService 和对照组的结果进行比较，并与临床检验结果进行相关性分析。 结果 1．原发性干燥综合征患者唇腺中水分子通道蛋白．5(AQP5)mRNA 水iF的表达，与非结缔组织病组相比是升高的，存在统计学差异 (P=0．046)。 2．干燥综合征患者唇腺中AQP5的mRNA表达与疾病病程呈正相 明显相关。 3．干燥综合征患者唇腺中AQP5蛋白水平的表达，与非干燥综合征 患者相比，不存在统计学差异。 4．干燥综合征患者，特别是原发性干燥综合征患者唇腺腺泡细胞腔 面AQP5蛋白的表达，与非结缔组织病组相比是降低的，存在统 计学差异(P0．05)。 5．干燥综合征患者唇腺腺泡细胞腔面AQP5蛋白的表达水平，与唇 腺淋巴细胞侵润灶评分呈负相关，Pearson相关系数为．O．36 (P=0．03)。 结论 原发性干燥综合征患者唇腺中AQP5的表达，与非结缔