2012高三生物二轮复习讲义高频考点+基因工程.docVIP

2012高三生物二轮复习讲义：高频考点 基因工程 核心知识备查 1.基因工程的基本工具 2.基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取途径 ①直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。 ②人工合成目的基因 a.化学合成法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。 b.人工合成法：以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。 c.利用PCR技术获得。 (2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建 (3)将目的基因导入受体细胞——转化 ②转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 (4)目的基因的检测与鉴定 ①检测： a.导入检测：DNA分子杂交法(使用DNA探针)。 转录检测：分子杂交法检测mRNA b.表达检测 翻译检测：免疫法，提取蛋白质，用相应的 抗体进行抗体—抗原杂交 ②鉴定：从个体生物学水平鉴定，如对转基因作物进行抗虫或抗病等的接种实验。 点拨： ①切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的黏性末端，有利于重组质粒的构建。 ②只有第三步“将目的基因导入受体细胞”过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发生碱基互补配对。 【例1】(2011·海南高考)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_______（相同，不同）黏性末端的限制酶。 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_______处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___________________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成______，常用抗原-抗体杂交技术。 (3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上。 【标准解答】（1）限制酶切割DNA可以产生黏性末端和平末端。一般同一种限制酶切割目的基因和质粒，产生相同的黏性末端。（2）基因表达载体中启动子是RNA聚合酶特异性识别并结合的位置，驱动基因转录。用大肠杆菌作为受体细胞时，要用Ca2+处理，以利于表达载体进入。检测目的基因是否转录，可用分子杂交技术，检测目的基因是否表达出蛋白质，可用抗原—抗体杂交技术。（3）目的基因插入农杆菌质粒DNA上，然后插入植物细胞的染色体上。 答案：（1）平 相同 （2）提供RNA聚合酶特异性识别和结合位点，驱动基因转录 Ca2+ DNA—RNA分子杂交技术 胰岛素（蛋白质）（3）T—DNA 染色体 点拨： 1.从“基因表达”层面理解基因表达载体的必需元件 (1)基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点。 ①启动子：RNA聚合酶识别和结合位点，启动转录。 ②终止子：终止转录的位点。 ③目的基因：其表达需要调控序列启动子和终止子。 (2)基因表达载体的构建过程 2.区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 （1）一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 （2）每种酶一个切点：①因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。②一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。 随堂练习： 1.(2011·四平模拟)用某人的胰岛素基因制成的DNA探针检测下列物质，能形成杂交分子的是（ ） ①该人胰岛A细胞中的DNA ②该人胰岛B细胞中的mRNA ③该人胰岛A细胞中的mRNA ④该人肝细胞中的DNA A.①②③④ B.①②③ C.①②④ D.② 【解析】选C。胰岛素基因探针的碱基排列顺序与胰岛素基因中的一条链相同，因此可以与胰岛素基因、胰岛素基因转录形成的mRNA形成杂交分子；胰岛素基因存在于所有的体细胞中，但是该基因只在胰岛B细胞中表达。 2.(2011·杭州模拟)应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品，是生物科学技术转化为生产力的重要体现。请据图回答下列问题： (1)在培育转基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________________，②过程常用的方法是__________ __________。 (2)转基因牛