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* * * * * * * * * * * * * * * * 为 了 每 个 人 的 健 康 ！ 增敏化学发光免疫分析系统 (ECLIA) 综述 北京源德生物医学工程有限公司 发光免疫分析 荧光 电化学发光 化学发光 生物发光 分 子 发 光 免 疫 反 应 利用抗原、抗体之间的特异性结合来定性或定量测定、分析特定物质的方法 化学发光免疫分析技术是上世纪末以来，全世界范围内快速发展起来的一种非放射性的临床标记免疫分析检测技术。其原理是利用发光放大信号，直接检测标定物标记的鲁米诺的浓度，从而通过计算获得待测物的含量。 关于化学发光免疫分析技术 无需外界激发光源 反应能量绝大部分用于发光而不是发热，发射波长也与温度无关 无需终止反应，也不受朗伯-比尔定律限制 按化学反应类型分类 酶促化学发光 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统 非酶促化学发光 吖啶酯\吖啶磺酰胺系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统 闪光 发光时间在数秒内 如： 吖啶酯以原位进样和时间积分法测量 辉光 发光时间在数十分钟以上 如： HRP-鲁米诺系统 AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、 以速率法测量。 按发光持续时间分类 化学发光（ECLIA）的分类 时间 发光信号 辉光坪区 速率法测量 原位进样 积分法测量 闪光尖峰 鲁米诺及衍生物的增敏化学发光系统 H2O2+ NH2 O O NH NH N2 OH- HRP NH2 CO2- CO2- +Photon (425nm) R OH R OH N S R B OH OH （Enhancer） 常见的化学发光系统 (Ⅰ) 4-碘苯酚,4-羟基肉桂酸等 AMPPD 及衍生物化学发光系统 + * Photon (477nm) AP O O OCH3 OPO32- O- O O OCH3 O O- O OCH3 常见的化学发光系统(Ⅱ) CH3 C=O O R N+ OH- H+ H2O2 + H2O + R OH Photon + CO2 + CH3 C=O O R N HO CH3 C=O O R N HOO CH3 O N CH3 O N C=O O 吖啶脂化学发光系统 常见的化学发光系统(Ⅲ) 三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+系统 常见的化学发光系统(Ⅳ) [Ru(bpy)3]2+ + (TPA) [Ru(bpy)3]3+ + (TPA) + Photon (620nm) [Ru(bpy)3]2+ + 二丙胺 乙醛 + ( Wallc Auto DELFIA) A：稀土螯合物荧光衰变曲线 B：背景荧光衰变曲线 tg: 门时间 P：激发光脉冲时间 td：延迟时间 400 3 800 1000 uS 时间分辨荧光免疫分析系统(Ⅴ) 三价稀土镧系元素 （Eu、Tb、Sm、Dy) 光电倍增管 高压 高速放大器 高速比较器 高速分频器 发光样品 产生光子 激发光阴极 产生光电子 在阳极上形成较强信号 脉冲信号 相对发光单位 数字脉冲(RLU) 在各打拿极之间得到 能量和数目的倍增 发光信号检测 核心部件-单光子计数仪的工作原理 彻底消除了放射性危害 无半衰期限制 试剂盒保存有效期时间长 试剂稳定性强 容易实现连续、动态、重复检测 适合于复合标记系统进行多指标并行检测 操作简单、反应速度快、容易实现自动化 灵敏度和线性范围超过以往检测技术 光生物学检测技术的优越性 以TSH（促甲状腺素）为例 第一代 放免 功能灵敏度 1-2mIU/L 意义不大 固相免放 功能灵敏度 0.1-0.2mIU/L 开始应用 第二代 发光免疫 功能灵敏度 0.01-0.02mIU/L 首选指标 增敏化学发光 功能灵敏度 0.001-0.002mIU/L 更新了部分临床概念，改写了甲功的调控理论 第三代 第四代 光学技术-临床免疫分析划时代的进步 商品化的光生物学标记检测技术性能比较 技术类型 标记、反应体系 主要优点 主要不足 化 学 发 光 酶促 过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强剂等 测量方式简单（速率法）成本较低、灵敏度较高 工作曲线随时