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细菌内毒素方法学验证方案 生效日期： 再验证时间：  审批表 部门 姓名 签名 日期 制定人 质量管理部 年 月 日 审核人 质量管理部 年 月 日 审核人 辐射防护部 年 月 日 批准人 质量管理部 年 月 日 1．概述 细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中应用广泛，本方案通过对无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99mTc]放射性药品的细菌内毒素检测，对生产过程进行质量控制。因此对细菌内毒素检验方法的验证就显得尤为重要。 2．目的 为了保证所购买的无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99mTc]放射性药品的细菌内毒素检验方法的专属性和灵敏性，且保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。 3．范围 本方案适用于无菌氯化钠溶液、配套药盒以及本公司所生产的锝[99mTc]放射性药品的无菌检查方法的验证。 4．确认小组成员与职责 成立确认小组，明确各成员及相应职责。 职务 部门 姓名 职责 组长 质量管理部 负责验证方案和报告的批准，指导验证项目的实施。 组员 质量管理部 负责起草验证方案，负责验证项目的实施，协调、解决验证过程出现的问题，参与结果评价，完成验证报告。 组员 质量管理部 参与验证项目实施的具体工作，收集、整理验证所需文件，完成测试、检验记录和复核记录的填写。 组员 质量管理部 负责验证方案和报告审核，参与完成验证项目的实施，验证总结和结果评价的会签。 组员 辐射防护部 监督整个验证项目的实施，保证实施过程的安全性。 5．参考文件 5.1确认与验证管理规程 5.2《中国药典》2010年版二部附录XI E 6．验证所需仪器和材料 6．1验证中所用到的仪器：电子天平、电热干燥箱、恒温水浴箱、水银温度计和旋涡混合器，验证所涉及到的仪器均经过检定或确认合格，且在有效期内。 6．2验证所需试剂：具有国家主管部门的批准文号的鲎试剂和由中国药品生物制品检定所统一发放的细菌内毒素工作标准品。 7.验证标准 在实验结果中，必须要阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。 8.验证步骤 8.1实验前准备 验证前首先要进行细菌内毒素标准品的制备，内毒素限值的确定。然后确认鲎试剂是否进行灵敏度复核和干扰试验。确定干扰试验中的最大稀释倍数（MVD）。 8.1.1根据2010年版中国药典二部附录Ⅺ?E细菌内毒素检查法中规定，细菌内毒素限值计算公式：? L=K/M 式中 ?L为供试品的细菌内毒素限值，本品以EU/mg表示； ?????? K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU/（kg．h）；? ????? M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。注射时间若不足1小时，按1小时计算。本品以腺苷蛋氨酸计最大剂量为1000mg。? ??L=5EU/（kg．h）*60kg*1h/1000mg=0.3EU/mg?因此本品的细菌内毒素限值为0.3EU/mg。 8.2.2?确定最大有效稀释倍数（MVD）? 样品溶液的制备：取注射用********适量（约相当于含腺苷蛋氨酸500mg）加入注射用溶剂5ml，再用细菌内毒素检查用水稀释至每1ml含腺苷蛋氨酸10mg的溶液。本品内毒素限值为0.3EU/mg。? MVD=cL/λ L=0.3EU/ml????c=10mg/ml????λ1=0.5?EU/ml，λ2=0.25?EU/ml ??? 因此MVD1=6，MVD2=12 8.1.3细菌内毒素标准溶液的制备 取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30?秒钟。 8.2细菌内毒素检查 在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。 8.2.1.操作方法 8.2.1.1制备内毒素标准对照溶液 取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（方法同8.1.3）。 8.2.1.2.供试品溶液的制备：（稀释倍数不得超过MVD） 取注射用********加入注射用溶剂并制成每1ml含腺苷蛋氨酸10mg的溶液，再根据MVD加入细菌内毒素检查用水