端粒和端粒酶分析.pptVIP

端粒酶活化是肿瘤的显著特征 尽管有研究认为端粒长度维持还可以借助于非端粒酶依赖模式，即端粒替代延长（alternative Lengthening of telomere ALT）机制，但其存在并不能否认永生化细胞中端粒酶的重要作用。自从1994年Kim等创立TRAP法检测端粒酶活性以来，越来越多的文献证明端粒酶活性在大多数人类原发性肿瘤标本及肿瘤衍生细胞系中可被检测到。美国学者在400多例来源于12 种不同组织的原发肿瘤病例中，肿瘤组织的端粒酶阳性率高达84.8％，而肿瘤周围组织或良性病变中阳性率仅为4.4％。 附表 人体组织中端粒酶活性 365/430 (84.8) 14/332 （4.2%） 合计 24/26 (92.3) 8/93（8.6%） 其它（头顶部，Wilms瘤） 6/8（75%） —— 脑 21/23（91.3%） —— 血液（淋巴瘤，CLL ALL） 94/100（94%） 0/17（0） 神经母细胞瘤 40/55（72.7%） 0/55（0） 肾 7/7（100%） 0/8（0） 卵巢 1/1（100%） —— 肝 22/23（95.6%） 0/45（0） 结肠 23/27（85.1%） 1/18（5.6%） 前列腺 19/24（79.6%） 2/28（7.1%） 乳腺 109/136（80.1%） 3/68（4.4%） 肺 肿瘤组织（%） 与肿瘤邻近正常组织/良性病变 肿瘤部位/类型 Shay等报道了几年不同学者对肿瘤端粒酶探讨的检测结果，总结了正常组织（196例），原位癌（410例），恶性肿瘤（2031例）和癌旁组织（690例）的端粒酶的阳性率，它们分别是0.5%、30%、85%和11%。在前列腺癌、乳腺、胰腺、肺、肝的早期癌中端粒酶的阳性率为85.0%～95.0%，而对应的癌旁或良性病变组织中，端粒酶基本上不能检出或活性极微弱。Sumida等的研究结果表明,端粒酶在各种肿瘤中的阳性率分别为:口腔鳞状细胞癌80%～90%,食道癌87%,胃癌85%,肺癌80.1%,肝癌85%,乳腺癌85%,肾癌71%,胰腺癌95%,端粒酶阳性率与肿瘤发生之间表现出良好的相关性。 * * 端粒与端粒酶 早在30年代，两名遗传学家Muller和Mcclintock分别在不同的实验室用不同的生物做实验发现染色体末端结构对保持染色体的稳定十分重要，Muller将这一结构命名为端粒（telomere）。直到1985年Greider等从四膜虫中真正证实了端粒的结构为极简单的6个核苷酸TTAGGG序列的多次重复后发现了端粒酶(telomerase TRAP-eze) 。 端粒与端粒酶是当今生物学研究的热点。 端粒是位于真核细胞染色体末端的核酸－蛋白复合体,其功能在于维持染色体的稳定性和完整性。 端粒酶是一种核酸核蛋白酶, 能以自身的RNA为模板合成端粒的重复序列,以维持端粒长度的稳定性。 许多研究表明,端粒、端粒酶的功能失调将影响细胞的生物学行为，包括细胞周期的稳定性、细胞增殖、癌变、凋亡、衰老。 端粒与端粒酶 一、端粒的结构与功能　 1972年James Watson提出了“复制末端问题”，复制DNA的DNA多聚酶并不能将线性染色体末端的DNA完全复制。也就是说在线性DNA复制时，DNA多聚酶留下染色体末端一段DNA（一段端粒）不复制。 端粒DNA复制的特点是在每次DNA 复制中，每条染色体的3端均有一段DNA无法得到复制，随着细胞每次分裂，染色体3一末端将持续丧失50-200bp的DNA，因而细胞分裂具有一定的限度，即分裂寿命。所以端粒的长度可作为细胞的“分裂时钟”，反映细胞分裂能力。 目 录 真核细胞染色体末端会随着细胞分裂而缩短，这个缩短的端粒再传给子细胞后，随细胞的再次分裂进一步缩短。随着每次细胞分裂，染色体末端逐渐缩短，直至细胞衰老。人类体细胞遵循这个规则从细胞出生到衰老，单细胞生物遵循这个规则分裂后定有其它机制保持单细胞生物传代存活，生殖细胞亦如此。 端粒：是真核细胞线性染色体末端特殊结构。 由端粒DNA和端粒相关蛋白组成。 端粒DNA：为不含功能基因的简单、高度重复序列, 在生物进化过程中具有高度保守性。 不同物种的端粒DNA 序列存在差异。 人类及其它脊椎动物染色体端粒的结构是5′TTAGGG3′的重复序列, 长约15kb。体细胞的端粒有限