反义核酸药物分析.pptVIP

反义寡聚核苷酸（antisense oligonucleotides， asON）：目前研究的热点。是一小段与mRNA或DNA特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的短核酸片断。 反义核酸技术：是指利用反义核酸的特异性来抑制某些基因表达技术。 反义药物：利用这一技术研制的药物。 国外已有反义药物应用于临床,Ｓｃｉｅｎｃｅ杂志1998年7月报道了第一个通过ＦＤＡ认证的反义药物,即用于治疗艾滋病人巨细胞病毒感染的视网膜炎的福米韦生(Ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ, Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ),这是ISIS公司的一大成果, 此外还有多种反义药物包括核酶在内的新一代反义药物进入临床。 二、反义药物的作用机理 反义核酸可在复制、转录、剪接、转运和翻译 等各个环节上发挥调控作用。 其机制为： 该质粒复制起始时，引物 (RNA II) 与其模板链结合，并在DNA聚合酶参与下合成新的DNA子链。但是很快就有一种长约100个核苷酸的反义RNA分子 (RNA I) 生成。 RNA I与RNA II -552----447核苷酸互补,且互补区位于复制起始位点上游,它在Col E1复制过程中能与RNAⅡ的5’-末端互补结合，使其构型改变，从而阻碍了RNAⅡ与DNA模板链的结合，RNAⅡ不再起到引物的作用，质粒DNA的复制 终止。 见图示： 2、在转录水平上： 反义RNA可与mRNA 5’-端互补,从而阻止了RNA的完整转录。 大肠杆菌的cAMP受体蛋白基因（CRP)的转录会受到一种小分子反义RNA的制约。这种反义RNA可与CRP基因转录起始生成的mRAN分子的5’-端序列互补，形成特异的二级结构，它类似于能促使转录作用终止的柄-环结构，空间构象障碍迫使RNA聚合酶脱离DNA模板，停止转录。 1、作用于mRNA 5’-末端，阻止帽子结构的形成； 2、作用于外显子和内含子的连结区，阻止前体mRNA的剪接； 3、作用于PolyA形成位点，阻止mRNA的成熟及向胞浆的转运； 4、与mRNA结合，使得mRNA易被酶识别而被降解，从而使蛋白质的表达受到抑制。 特 点 选择性强: asON只作用于靶基因,不与非相关基因作用,特异性高，且片断短,合成方便、经济; 效率高: asON几乎可以完全阻断靶基因的翻译; 低毒: asON作用于局部,对全身影响小。 这些区段均为基因表达的关键区或敏感区,对基因的调控起重要的作用。 一般而言,只要人工设计合成15----20个碱基长度的反义ＤＮＡ或反义ＲＮＡ,就足以使此反义核酸与靶ｍＲＮＡ形成结合作用,且这种结合调节是非常特异性的。 碱基是asON与靶基因通过氢键形成而直接接触的部位,而氢键的形成又是asON发挥功能的必要条件。因此,该部位的修饰应以不影响氢键形成为前提。任何影响A-T（U）/G-C碱基配对的修饰都会因碱基错配而导致asON与靶基因的结合或特异性降低或丢失。 如： 1、在胞嘧啶的5位点甲基化（最常使用） 2、使用三氟甲基、咪唑丙基、炔丙基等。 即综合应用多种化学修饰,效果很好,有“第二代反义药物”之称。它以PS-ODN为核心，两翼序列上的核糖的2’位被其它基团修饰。除了化学修饰，还可以试作转基因表达反义核酸，在体细胞内以DNA为模板转录产生,模拟天然ＲＮＡ的形成过程,这样表达的反义ＲＮＡ可能在细胞内被天然修饰,从而稳定性得到提高。 近年来,反义药物应用于抗癌研究又涉及到新的领域。研究发现,浸润和转移是恶性肿瘤的生物学特性。 文献认为乙酰肝素酶与黑素瘤细胞潜在性转移相关连,神经生长因子(ＮＧＦ)或神经性营养因子 3(ＮＴ 3)不仅增加黑素瘤细胞乙酰肝素酶生成,而且有力促进其基质胶渗入。 以黑素瘤细胞Ｐ75ＮＴＲ(Ｐ75抑癌基因ＮＴ受体)ｍＲＮＡ为反义靶点,反义ＯＤＮ能降低ＮＴ 3与Ｐ75ＮＴＲ结合和基质胶渗入,达到抑制黑素瘤细胞的浸润。 同时,研究还发现,肿瘤的生长和转移均依赖于血管生成,而血管生成早期一个关键步骤就是激活的内皮细胞产生尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(ｕＰＡ)。 Ｆｉｂｂｉ等应用反义ｕＰＡＲ(ｕＰＡ受体)ｍＲＮＡＯＤＮ拮抗ｕＰＡ与ｕＰＡＲ结合后的血管生成转换,进而抑