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“顽拗植物”DNA提取与纯化的问题与展望 摘要：植物DNA的提取和纯化是分子生物学研究的基础，然而大多数植物尤其是所谓的“顽拗植物”含有大量的多糖、多酚等其他次生代谢物，因此如何高效地提取高质量的DNA成了植物基因组研究的首要前提，也是目前很多植物分子生物学研究的瓶颈。本文就目前常用的植物DNA提取和纯化的方法及各自存在的问题进行了简单的综述。 关键词：DNA提取，DNA纯化，“顽拗植物” The Problems and Prospect of DNA Extraction and Purification in “Recalcitrant Plant” Abstract: The DNA extraction and purification of plants is the basis of the study on Molecular Biology, however, most of the plants, especially the so-called “Recalcitrant plant” contain large amount of polysaccharide, polyphenol and other secondary metabolites, therefore, how to effectively extract high quality DNA became the first premise of plant genome research and the bottleneck of many Plant Molecular Biology research. This paper briefly summarized the commonly used DNA extraction and purification methods of plants and their existing problems of a simple review. Key words: DNA extraction, DNA purification, “Recalcitrant plant” 分子生物学是一门年轻而又古老的学科。早在1871年，Lankester就提出：生物不同种系间的化学和分子差异的发现和分析，对确定系统发生的关系，要比总体形态的比较研究更为重要[]。自20世纪50年代Watson和Crick提出DNA双螺旋模型以来，分子生物学在广度和深度上都获得了空前的发展。作为分子生物学研究的基础，DNA在生物学领域的研究日渐深入[]。而DNA的提取是分子生物学研究的重要手段，是分子标记、基因克隆、基因探测等后续研究的基础[-]。然而如果材料中含有大量的多糖、蛋白质、多酚、酯类等次生代谢物，在沉淀过程中产生大量凝胶状物质，就会阻碍实验的进程[]。因此，快速地提取和纯化结构完整的、高分子量的DNA对于很多分子生物学的应用是至关重要的，例如长片段DNA的PCR扩增、限制性酶切、Southern印迹分析和基因文库的构建等[]。 虽然目前已经发展了很多从植物中提取纯化DNA的方法，但对于很多特殊的植物材料，如“顽拗植物”、转基因食品以及出土的古老植物材料等，这些方法并不适用，并且即使对这些方法加以改进，也难以提取出高质量的DNA。因此发展更简单、更省时、更经济的DNA提取与纯化方法将在很大程度上推动科研、环保、食品、医药、农业、畜牧业等诸多领域的发展。本文就目前比较常用的植物DNA提取方法和近年来不同学者在研究不同植物时的改良法以及“顽拗植物”DNA的提取仍然存在的问题进行了综述。 1 植物材料 1.1 “顽拗植物” 在特定的条件下，植物的一些重要初生代谢产物，如乙酰辅酶A、丙二酸单酰辅酶A、莽草酸及一些氨基酸等，会作为原料或前体，进一步经过不同的次生代谢过程而产生一些“天然产物”如黄酮、生物碱、萜类等，这些天然产物称为次生代谢物。近年来研究发现，所有旺盛生长的细胞中都发生着次生代谢物的不断合成和转化，在植物生命活动中起着非常重要的作用[]。 所谓“顽拗植物（Recalcitrant plant）”，就是指那些众所周知的很难提取DNA的植物种类，因为这些植物的细胞结构比较复杂，并且含有很高水平多糖、多酚、皂苷、甾醇、单宁等其他次生代谢物[-]。 植物细胞由原生质体和细胞壁两部分组成，原生质体由细胞核和细胞质组成，细胞质又包括质膜、细胞器和胞基质。植物DNA就存在于细胞核和某些细胞器如叶绿体、线粒体中[]。因此在提取植物组织DNA之前需要裂解细胞以释放出DNA，常用的裂解植物细胞的方法包括物理和化学方法，在某些情况下需要用酶解法来消化蛋白质或降解一些细胞组分[]。正是植物组织具有坚固的细胞壁，核酸含量较少，又