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绪论（2学时） 重点内容： 一、概念 1、植物组织培养是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术，由于培养的植物材料已脱离了母体，又叫植物离体培养（plant culture in vitro）。 2、无菌：是指使培养皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养皿中正常生长和发育。 3、人工控制的环境条件：是指对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工控制，以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长发育。 4、外植体（explant）：由活植物体上切取下来用于组织培养的器官或组织叫外植体。 5、愈伤组织（callus），原是指植物在受伤之后表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养中，则是在人工培养基上由外植体(explant)长出来的一团无序生长的薄壁细胞。愈伤组织培养所以是一种最常见的培养形式，是因为除茎尖分生组织培养和一部分器官培养以外，其他几种培养形式最终也都要经历愈伤组织才能产生再生植株，此外，愈伤组织还常常是悬浮培养的细胞和原生质体的来源。 二、植物组织培养的特点： 植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体的器官、组织和细胞。这一特点具体表现在以下几个方面： 组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。 组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的，除少数特殊情况（如进行营养缺陷型突变细胞的筛选）外，培养基中包括了植物生长所需的水分和一切大量元素、微量元素、有机物和植物激素（phytohormone）。培养基的PH和渗透压也是认为设定的。因此，在组织培养中的植物材料不需依靠自身的光合作用制造养分，而是处于完全的异养状态。 组织培养的起始材料可以是植物的器官、组织，也可以是单个的细胞，它们都处于离体状态下。细胞全能性不仅表现在二倍体细胞水平，而且也表现在单倍体细胞（如小孢子）和三倍体（如胚乳）水平上，即使是去掉了细胞壁的细胞（原生质体），在组织培养条件下也能再生完整植株。 组织培养通过连续继代培养可以不断增殖，形成克隆，或通过改变培养基成分，特别是其中的植物激素的种类和配比，而达到不同的实验目的，如茎芽增殖或生根。 组织培养是在封闭的容器中进行的，容器内气体和环境气体可通过瓶塞或其他封口材料进行交换。容器内内的湿度在通常情况下几乎是100%，因此，组培苗叶表面一般都无角质层或蜡质层，且气孔保卫细胞功能缺乏，气孔始终都是张开的。 组织培养的环境温度、光照强度和时间等都是人为设定的，找出这些物理因素的最适参数对组织培养的成功也很重要。 三、植物组织培养的应用与展望 概括地说，组织培养系统在农业上的应用有以下几个方面： 1、植物离体快繁 2、病毒苗木培育 3、培育新品种或创造新物种 4、次生代谢物生产 5、植物种质资源的离体保存 6、人工种子 第一章 实验室的基本设备和一般技术 本章重点内容：灭菌技术、培养基 一、灭菌技术 常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不伺材料不同目的适当选用。 1、器具的灭菌 （1）干热灭菌法 利用鼓风干燥箱（烘箱）进行烘烤灭菌的方法。此法适用于各种玻璃器皿和器械的灭菌消毒。 （2）高压蒸汽灭菌法 利用高压蒸汽灭菌的方法，是目前最常用的一种灭菌方法。此法适用于培养基、蒸馏水、各种器械、棉塞、包头纸等的灭菌。 2、培养基的灭菌 污染的病原分为细菌和真菌两大类。细菌污染的特点是菌斑呈粘液状，而且在接种2-3天后即可发现。真菌污染的特点是在接种5-10天才能发现不同颜色的霉菌。发现污染的材料应及时处理。 培养基的污染有几个可能的来源：①培养容器；②培养基本身；③外植体；④接种室的环境；⑤在接种和继代时用以操作植物材料的器械；⑥培养室的环境。 （1）高压蒸汽灭菌法 （2）过滤除菌法 一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法。3、外植体（植物材料）灭菌 首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70％酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70％酒精浸10-30s。灭菌剂处理。表面灭