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精浆中性?α-糖苷酶定量检测 临床意义 中性α-葡糖苷酶是附睾分泌功能的指标。结合激素和睾丸其他指标，对远端输精管阻塞有较好的诊断价值。果糖结合中性α-葡糖苷酶检测，可大大提高其无创性诊断阻塞性无精子症的价值。 输出小管:为附睾头部附睾  附睾管:组成附睾的体、尾部分泌有肉毒碱、甘油磷酸胆碱、 唾液酸与精子的功能性成熟有关 梗阻性无精子症 是指从曲细精管到射精管任何一处发生阻塞造成的无精子症。 分为先天性和后天性两类，前者主要包括：先天性射精管缺如或闭锁、先天性精囊缺如、先天性附睾发育不良和附睾与睾丸不连接；后者主要是由于感染因素引起，最常见的是急慢性附睾炎或睾丸炎，其次是各种原因引起的输精管道的损伤。 内分泌疾病与激素的关系 梗阻性无精子症： FSH 正常 LH 正常 T0 正常 E2 正常 无精子症组项分析 CASA 精液沉渣镜检 精浆果糖 精浆中性α-葡糖苷酶 精液感染性检测（弹性硬蛋白酶） 血激素（FSH、LH、PRL、T0、E2） 精囊腺缺如: 无精子 不凝固 PH7.0 无特殊气味 精浆果糖 0或极低 血正常 NAG 0或极低 感染性检测正常 精囊疾患 精浆果糖偏低 感染性检测正常 NAG正常 逆行射精或射精管梗阻 精浆果糖偏低 感染性检测正常 射精后立即留尿液标本 镜检尿沉渣精子 精囊腺输精管发育不全 精浆果糖偏低 感染性检测偏低 精液不凝固 ph7.0 无特殊气味 性腺功能低下 持续性精液量低精子或生精阳性 FQ正常 NAG正常 血激素偏低 附性腺感染 感染性检测(PMN 过氧化物酶 病原体培养)阳性 检验原理 酸性条件下，通过对精浆酸性α-葡糖苷酶的抑制，保留中性α-葡糖苷酶活性，后者分解底物生成终产物对硝基芬，对硝基芬在405nm波长有最大吸收波长，颜色深浅与单位时间内精浆中性α-葡糖苷酶成正比。 样本要求 记录受检者一次射精的精液总量（ml），精液液化后以3000g离心10分钟，保留精浆。若样本不能立即测定，可以Eppendorf 管分装精浆，-20℃一下保存待检。 试剂准备和储存要求 糖苷酶抑制剂冻干粉以120μl蒸馏水溶解，2-8℃可使用20天，分装保存-20 ℃一下可长期使用（切勿反复冻融） 底物冻干粉以2.2ml底物溶解液充分溶解，分装保存，溶解后的底物液，2-8 ℃保存可使用5天，-20 ℃以下可保存数月（切勿反复冻融） 经验：底物一定要临用现配（37 ℃ 预温5分钟的时候溶解），决不能2-8 ℃保存。 操作方法 每个待检标本均需同时设定测定和对照管,标准管仅在比色时使用 上述样品管混匀后置37℃预温5分钟,同时底物溶解后预温5分钟 同时加入底物100ul,37 ℃准确反应25分钟 加入终止液1000ul 在微孔板上加样顺序如下,每孔加入样本或标准品各250ul,酶标仪450nm比色 关键步骤:精确的温度和孵育时间 结果计算 使用Bio-Tek Elx800酶标仪输出的结果即为检测标本的真实浓度(U/L) 质控管实际浓度=Q-QB, 标本实际浓度=RX-RXB 标本最终检测结果以“精浆中性α-葡糖苷酶总活性”方式报告,即 总活性=标本浓度(U/L) ×一次射精的精液体积(ml)= mU/一次射精 质控 质控液使用的是酸性α-葡糖苷酶,因此检测时不能加酸性抑制剂 注意事项 1.试剂加样量少,操作时必须谨慎加样,加液到管底且保证各液体混合在一起,充分混匀后再预温 2.酸性抑制剂内若出现颗粒,应置37℃水浴几分钟,待溶解后再使用 3.由于酸性抑制剂对温度较敏感,从水浴状态转移至室温,有时极易产生沉淀,因此反应液预温后最好再37 ℃水浴状态下加入底物液 4.反应完毕迅速加入终止液,少数反应管内会出现不溶物,属正常现象,若仍有细小难溶物则离心后取上清液比色. 5.比色前微孔板应充分振荡,孔内避免气泡产生,微孔底部必须干燥情清洁,比色前最好用吸水纸擦拭底部,,以保证结果准确性 6.糖苷酶抑制剂溶解后应迅速分装,-20℃以下冷冻保存,溶解后的抑制剂2-8℃保存可用一周 7.底物见光易分解,注意避光保存,溶解后如果不能一次性用完,最好分装后置-20 ℃以下保存.2-8℃保存的底物颜色将逐渐变黄,若呈明显的黄色,则表明已经失效(可通过质控液监控). * * 5 5 糖苷酶抑制剂ul 5 5 样