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基因工程填空背诵 1 基因工程的概念：基因工程是在水平上进行,因此又叫做。 4 限制酶的功能：识别特定的核苷酸序列，并在特定位点切割磷酸二酯键。 5 限制酶切割的结果：黏性末端和平末端。 6 DNA连接酶功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 7 DNA聚合酶的作用部位是磷酸二酯键。 8 运载体具备的条件： 9 基因工程的载体有： 和 动、植物病毒 等。 10 最早应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。 11基因的基本操作程序：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 12 基因工程的核心是：基因表达载体的构建。 13 获取目的基因的方法是①从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。②人工合成法：逆转录法和化学合成法。③PCR扩增 取原核细胞的目的基因方法一般是：直接分离法。 获取真核细胞的目的基因一般是人工合成法。 16 PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一种在生物体外复制特定DNA片断的核酸合成技术。17 PCR原理是：DNA双连复制的原理。前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列。 18 PCR条件：模板、ATP、酶、原料（四种游离的脱氧核苷酸） 19 PCR酶：热稳定DNA聚合酶 （耐高温DNA聚合酶） 20 即基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因 21标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 基因表达载体构建方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接形成重组质粒。 将目的基因导入植物细胞：最常用方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法。 农杆菌转化法原理： ①农杆菌能感染双子叶植物和裸子植物. ② 农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。 将目的基因导入动物细胞：显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 选受精卵做受体的原因：具有发育的全能性 将目的基因导入微生物细胞：Ca＋处理法 。 选用微生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 将目的基因导入水稻（单子叶植物）方法是：基因枪法或花粉管通道法 目的基因检测与鉴定首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。 其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是采用分子杂交技术。 最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用抗原—抗体杂交技术。 4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如抗虫或抗病的接种实验等。 目的基因成功表达的标志受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质 植物细胞工程包括什么技术：植物组织培养 、 植物体细胞杂交 。 动物细胞工程包括哪些技术： 动物细胞培养、 动物细胞核移植 、 动物细胞融合 、 单克隆抗体制备 。 42 植物细胞工程的理论基础（原理）：细胞全能性 全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞 43 植物组织培养技术过程：离体的植物器官、组织或细胞 ―（脱分化） 细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度和pH ：适宜温度36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 克隆动物（如右图）应用了哪些现代生物技术：动物细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植技术。 为什么选择去核的卵母细胞：①体积大，易操作②营养物质丰富③卵母细胞含有表达全能性的物质条件 动物细胞融合诱导方法：聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激 意义：克服了远缘杂交的不亲和性， 单克隆抗体制备 两次筛选的目的是：第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出所需抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。 单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 单克隆抗体的作用：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”。 技术 原理 植物组织培养 植物细胞的全能性 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性；植物细胞的全能性 动物细胞培养 细胞增殖 动物细胞融合 细胞膜的流动性 核移植技术 动物细胞核的全能性 愈伤