高三生物第3章遗传与基因工程第三节基因工程的基本内容（人教版选修全一册）.docVIP

高三生物基因工程的基本内容 一. 本周教学内容： 基因工程的基本内容 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。是在生物体外，通过对DNA分子进行人工剪切和拼接，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。在DNA分子水平上进行设计的基因操作的工具 将抗虫的基因从某种生物（如苏云金芽孢杆菌）中提取出来，入棉的细胞中，与棉细胞中的DNA结合起来，在棉中发挥作用。首先苏云金芽孢杆菌的一个DNA分子上辨别出所需要的基因，并且把它切割下来其次将切割下来的抗虫基因与棉的DNA缝合起来 基因的剪刀——限制性内切酶 DNA限制性内切酶（以下简称限制酶）。主要于微生物中目前已经发现了200多种限制酶一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子例如从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A间切开。基因的针线——DNA连接酶黏性末端被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫做黏性末端。DNA连接酶两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，然后让两者的黏性末端互补的碱基黏合起来，DNA连接酶断口处把两条DNA末端之间的缝隙缝合起来 C. 基因的运输工具——运载体要将一个外源基因，送入受体细胞。条件：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存具有多个限制酶切点以便与外源基因连接具有某些标记基因便于进行筛选运载体质粒、噬菌体和动植物病毒等。 质粒是基因工程最常用的运载体，最常用的质粒是大肠杆菌的质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子大肠杆菌质粒中常含抗药基因抗四环素的标记基因细菌质粒的大小只有普通细菌染色体DNA的百分之一质粒能够友好地借居在宿主细胞中。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。质粒的复制则只能在宿主细胞内完成。 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等细菌中都有质粒。土壤农杆菌很容易感染植物细胞，使细胞生有瘤状物。培育转基因植物时，常常用土壤农杆菌中的质粒做运载体。基因操作的基本步骤 取目的基因目的基因是人们所需要的特定基因苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因种子的贮藏蛋白的基因人的胰岛素基因、干扰素基因等主要途径：从供体细胞的DNA中直接分离基因人工合成基因。 直接分离基因最常用的方法是鸟枪法，又叫散弹射击法。具体：供体细胞中的DNA切成许多片段受体细胞大量复制基因扩增含有目的基因的细胞把带有目的基因的DNA片段分离出来优点操作简便缺点工作量大，具有一定的盲目性真核细胞的基因含有不表达的DNA片段，不能直接用于基因的扩增和表达如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得。人工合成基因以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。单链DNA双链DNA（目的基因序列） （2）化学合成法 根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因mRNA序列DNA序列目的基因 优点：目的性强，比较容易获得真核基因序列 缺点：操作技术性强，不容易获取，基因表达不容易控制 主要应用：如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。DNA序列自动测序仪对提取出来的基因进行核苷酸序列分析，扩增DNA技术（也叫PCR技术），使目的基因在短时间内成百万倍地扩增。目的基因与运载体结合 B. 将目的基因导入受体细胞 常用受体细胞大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 主要借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。质粒细菌 感受态细胞：能够接受外源DNA的细胞 将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 目的基因的检测和表达在全部受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞很少必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法 （2）性状检测： 受体细胞表现出特定的性状才能说明目的基因完成了表达过程。 基因工程的成果与发展前景基因工程与医药卫生 生产基因工程药品药品生产直接从生物体的组织、细胞或血液中提取的原料限，价格昂贵。工程菌高效率高质量、低成本的药品。如胰岛素、干扰素和乙肝疫苗等胰岛素是治疗糖尿病的特效药。 来源 猪、牛胰腺提取 大肠杆菌工程菌分泌 产量 4—5克/100千克 100克/1000升培养液 比较 产量低、价格高、供不应求 产量高、工厂化生产、满足患者需要 白细胞介素－2是淋巴细胞产生的一种淋巴因子能促进淋巴细胞活化和增殖主要用于治疗肿