亲和色谱材料.ppt

4.3 亲和色谱(层析) Affinity Chromatography, AC 第一节 概述 原理 利用生物体中许多高分子化合物具有和某些相对应的分子可逆结合的特性建立的色谱法。 一、特点 高效、高收率、有浓缩效应，使用局限性 二、应用 高效从复杂混合物中得某一种物质； 基于生物功能可把有活性与无活性分开 三、基本过程 须找配基（它与底物专一可逆结合如下图） 说明： 1.偶联用Gel（须是活化偶联介质） 2.亲和吸附剂 高度专一亲和吸附剂 类专一亲和吸附剂 3.按相互作用力划分： 次级键——亲和色谱 配位键——螯合色谱 共价键——共价色谱 疏水键——疏水色谱 亲和层析的必要条件: 合适的配体（配基、ligand) 合适的载体（Matrix) 合适的吸附和洗脱条件 第二节 亲和色谱配基 (ligand L) ㈠ 作为配体的条件 亲和力大;具有解离平衡;与载体偶联不失活 ㈡常用系统 酶: 底物或类似物、辅助因子、可逆抑制剂、效应物 核酸: 互补顺序、组蛋白、结合蛋白、核酸多聚物 激素: 受体、运载蛋白 抗体: 抗原、病毒、细胞 外源凝集素: 多糖、糖蛋白、细胞 ㈢ 配体的浓度 一般使用较高的固定化配体浓度 配体亲和力高，且本身带电则浓度须降低