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认识显微镜 基本内容 一、各种显微镜（7种） （解剖镜、光学显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电子显微镜） 二、常用的微生物检测方法（视频） 三、课堂小结 四、作业 1、解剖显微镜 简介： 在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像清晰和宽阔，又具有长工作距离，并是适用范围非常广泛的常规显微镜。操作方便、直观、检定效率高。 特点： 1．双目镜筒中的左右两光束不是平行，而是具有一定的夹角——体视角（一般为12度---15度），因此成像具有三维立体感； 2．像是直立的，便于操作和解剖，这是由于在目镜下方的棱镜把像倒转过来的缘故； 3．虽然放大率不如常规显微镜，但其工作距离很长 4．焦深大，便于观察被检物体的全层。 　 5．视场直径大。 解剖镜下的蜱虫 2、光学显微镜 光学显微镜一般由载物台、聚光照明系统、物镜，目镜和调焦机构组成。 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。 分类： 按使用目镜的数目可分为双目和单目显微镜； 按图像是否有立体感可分为立体视觉和非立体视觉显微镜； 按观察对象可分为生物和金相显微镜等； 按光学原理可分为偏光，相衬和微差干涉对比显微镜等； 按光源类型可分为普通光、荧光、红外光和激光显微镜等； 按接收器类型可分为目视、摄影和电视显微镜等。 常用的显微镜有双目体视显微镜、金相显微镜、偏光显微镜、紫外荧光显微镜等。 3、荧光显微镜 ： 荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 正处于有丝分裂中期的动物上皮细胞。绿色的是微丝，红色为肌动蛋白，蓝色的染色体正处于赤道板。 4、相差显微镜 利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。主要用于观察活细胞或不染色的组织切片，有时也可用于观察缺少反差的染色样品。 相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能: ①将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开； ②将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。 这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。 5、暗视野显微镜 在聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 基本原理： 利用丁达尔效应。当一束光线透过黑暗的房间,从垂直于入射光的方向可以观察到空气里出现的一条光亮的灰尘“通路”,这种现象即丁达尔效应。 暗视野显微镜在普通的光学显微镜上换装暗视野聚光镜后,由于该聚光器内部抛物面结构的遮挡,照射在待检物体表面的光线不能直接进入物镜和目镜,仅散射光能通过,因而视野是黑暗的。 暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体；当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。 适用范围： 　　 暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。这些样品因为具有和周围环境相似的折射率，不易在一般明视野之下看的清楚，于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比。这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，只能看到物体的存在、运动和表面特征，不能辨清物体的细微结构。 6、激光共聚焦显微镜 植物细胞中过氧化氢含量(绿色荧光深度代表浓度)随盐胁迫时间进程(图片间时间间隔为5分钟)的变化 基本原理：　　 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰；激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔