淀粉酶的提取- α-淀粉酶的提取分离及测定.docVIP

α-淀粉酶的提取、分离及测定 （生化试验小组-2005.4） 试验全程安排： 第一天 样品的粗处理及粗分离，包括： 样品处理 离子交换色谱分离 紫外检测（紫外测定蛋白），绘出色谱图 收集样品 第二天 对各峰收集样品进行分析，包括： 精确测定蛋白含量（Folin-酚） 测定酶活 比活计算 第三天 对活性峰及原液进行分析及鉴定，包括： SDS－PAGE分析（分子量分析） 纯化倍数计算等 试验一、色谱分离淀粉酶 1.1 试剂及设备 离子交换树脂 -20℃冰箱 样品管（5-10ml试管） 1.5ml离心管 紫外分光光度计 α-淀粉酶样品 秒表 胶头吸管（进样用） 平衡缓冲液（pH8.0，0.01M磷酸盐缓冲液） 洗脱缓冲液（平衡缓冲液+0.1M，0.3M，0.5M，1.0M的氯化钠） 试剂瓶 1.2 离子交换色谱原理与方法 色谱(chromatography)是一种分离的技术,随着现代化学技术的发展应运而生。20世纪初在俄国的波兰植物化学家茨维特(Twseet)首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。到1907年茨维特的论文用俄文公开发表，他把这种方法命名为chromatography, 即中文的色谱，这就是现代色谱这一名词的来源。但由于茨维特当时没有知名度，而