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临床生物化学检验方法 手工法 自动生化分析仪法 临床生物化学检验方法 ◆ 手工法 分类 ● 比色法---以生成有色化合物的显色反应为基础。 ● 比浊法---以生成浊度化合物的反应为基础。 二者均以朗伯-比尔定律(A=Kbc)为基础。 求值 ● 对照品比较法：CX＝（AX/AR）CR 自动生化分析仪法---概念 自动生化分析仪是将过去生化分析中的取样、加试剂、混合、保温、比色、结果计算、书写报告等步骤的部分或全部由仪器自动来完成。 它具有快速、简便、灵敏、准确、微量等特点。 自动生化分析仪--构成 样品系统 试剂系统 反应系统（包括温控装置） 清洗系统 比色系统（光学系统：光源、单色器 、比色池、检测器等） 程序控制系统 自动生化分析仪---分类 按其反应装置的结构可分为： * 流动式自动生化分析仪：测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。存在较严重的交叉污染，结果不太准确，现已淘汰。 　　* 分立式自动生化分析仪：是每个待测样品与试剂混合间的化学反应都是分别在各自的反应皿中完成，不易出现交差污染，结果可靠。 ?? 终点分析法  连续监测法  比浊测定法  ● 终点分析法 ★ 一点终点法??  有单/双试剂，即待测物与试剂反应达到终点时，测定吸光度，计算待测物的浓度。（总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法） ★ 两点终点法（固定时间法）??  即在样品与试剂混合后读取一个点A1，一定时间后读取A2： ΔA=A2-A1，比较标准和测定的ΔA值，求得待测物的浓度。 在单试剂分析中，该法可以消除样品以及试剂的颜色、 浊度的干扰。（血清肌酐苦味酸法） 在双试剂分析中，该法还具有消除内源性 物质测定的干扰：加入试剂1后读取A1， 加入试剂2后读取A2： ΔA=A2-A1。  在酶促反应速度恒定期（零级反应期/线性反应期--反应速度与酶浓度成正比）来连续记录一定反应时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。  连续监测法(酶动力学法)? ★ 两点速率法 记录在零级反应期内两个时间点的吸光度，用两个点的吸光度的差值（ΔA）除以时间（分): ΔA/min 。 ★ 多点速率法 ? 记录在零级反应期内多个时间点（每隔2-30s)  的吸光度（至少4个点，3个ΔA），求出单位 时间内的反应速度：ΔA/min 。 ● 比浊测定法 ?? ??? 自动化生化分析仪一般用透射比浊分析，其原理是在光源的光路方向测量透过光强度，多用终点法测定。 血清特种蛋白如载脂蛋白、微量白蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。 生化分析仪基本参数及其应用 ﹩ 方法类型 终点法/连续监测法。反应方向分正向/向上（吸光度增加）或负向/ 向下（吸光度减低）。如ALT、AST选用负向反应。 ﹩ 温度?? 生化分析仪的恒温控制器有25℃、30℃、37℃三种温度，根据需要可 以任意选择。由于酶在达到最适温度以前 （10℃-37℃），温度每升高10℃，反应速 率增加1-2倍，因此IFCC(国际临床化学联 合会）推荐酶测定时的温度设置为37℃。  ﹩ 波长 ＊ 单波长?? ● 当测定体系中含有一种组分或在混合溶液中待测组分的 吸收峰与其他共存物质的吸收波长无重叠时可选用。 ● 如果一个物质有几个吸收峰，可选用吸光度最大的一个 波长，或者选择在吸收峰处吸光度随波长变化较少的某 个波长。 ＊ 双波长? ● 当被检溶液混浊或存在较多的干扰物质时，会出现非特异性光吸收，使 用双波长（主波长/辅助波长），以提高测定结果的准确性。 ● 辅助波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸的干扰。这些物质波长范围较 宽,有较强的光吸收，常同测定波长有重叠。 ● 辅助波长的设置原则：干扰物质在测定波长同辅助波长有相同