色谱分离技术资料.ppt

（四）操作方法 具有亲和力的一对分子中的一个作为配基，与不溶性载体结合，使之固化，装入色谱柱 含目的物的混合液作为流动相进入色谱柱，配基选择性吸附目的物质，杂质不能被吸附而直接流出。 改变条件使配基与其亲和物解离 亲和层析的基本过程： 具体操作： ① 样品制备 含杂质，需预处理： ② 配体与配基结合条件的选择 pH、缓冲液浓度、离子强度 ③ 柱操作 ④ 流速的控制 ⑤ 清洗 ⑥ 洗脱 ⑦ 柱的再生 蛋白沉淀、离子交换柱层析 柱的大小、长短 高速度、高效率 除去不结合的所有物质 特异性洗脱（竞争性置换目的物） 非特异性洗脱（调节pH、离子强度和种类、温度） （五）亲和色谱法的应用 1.亲和色谱法的特点： 专一、高效、简便、快速 2.应用 ① 分离和纯化各种生物分子 纯化生物大分子，适于从组织或发酵液中分离以下物质：杂质与目的物间的溶解度、分子大小、电荷分布等性质差异小，相对含量低，其他经典手段分离有困难的高分子物质；尤其是对分离某些不稳定的高分子物质更具有优越性。 如：酶、rRNA、抗原和抗体的分离，激素的提纯 ② 分离纯化各种功能细胞、细胞器、膜片段和病毒颗粒 ③ 用于各种生化成分的分析检测 ④ 与亲和色谱有关的特殊技术应用 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 凝胶色谱法 亲和色谱法 高效液相色谱法 混合物随流动相通过固定相时，由于固定相对混合物中各组