酶与蛋白质工程 第1章 蛋白质与蛋白质工程.pptVIP

第一讲 蛋白质与蛋白质工程 氨基酸的基本结构和构型 存在于自然界的氨基酸有300种。动物机体的蛋白质经强酸水解之后可以得到20种氨基酸，并且均为L-氨基酸（除了甘氨酸），含不对称的α-碳原子。它们之间的差别在于有不同的侧链基团 R 等电点 (isoelectric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，在电场中既不向阳极也不向阴极移动。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点 氨基酸在等电点时的特点： 1. 净电荷数等于零，在电场中不移动； 2. 此时氨基酸的溶解度最小 肽平面/酰胺平面 肽平面 蛋白质顺序测 定基本战略 一级结构测定的基本流程: (1) 拆分蛋白质分子的多肽链; (2) 鉴定多肽链的N一末端和C一末端残基; (3) 用两种或几种不同的断裂方法将多肽链裂解成较 小的片段; (4) 测定各肽段的氨基酸序列; (5) 重建完整多肽链的一级结构; (6) 确定半胱氨酸残基间形成的二硫键的位置 N-末端和C-末端氨基酸残基的确定— 为氨基酸序列排列建立两个重要的参考点 N端分析方法： C末端分析方法 多肽链部分裂解成较小的片段—化大为小，获得短肽段 酶解法: 胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶等 胰蛋白酶： R1=赖氨酸Lys和精氨酸Arg侧链 (专一性较强，水解速度快) R1=苯丙氨酸Phe, 色氨酸Trp, 酪氨酸Tyr （1）非共价键 氢键 离子键 范德瓦尔力 疏水作用 （2） S-S键 卷发(烫发)的生物化学基础 永久性卷发(烫发)是一项生物化学工程(biochemical engineering),?-角蛋白在烫发剂、湿热条件下头发中的二硫键和氢键打破，伸展转变为?-构象，在定型剂作用下冷却干燥时，发芯结构重组并稳定 这是因为?-角蛋白的侧链R基一般都比较大，不适于处在?-构象状态，此外?-角蛋白中的螺旋多肽链间有着很多的二硫键交联，这些交联键也是当外力解除后使肽链恢复原状(?-螺旋构象)的重要力量。 这就是卷发行业的生化基础 ?-角蛋白 丝心蛋白(fibroin)：这是蚕丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。丝心蛋白具有抗张强度高，质地柔软的特性，但不能拉伸。丝心蛋白是典型的反平行式?-折叠片，多肽链取锯齿状折叠构象 正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图 谷氨酸（极性） 缬氨酸（非极性） 正常细胞 镰刀形细胞 镰刀状贫血病—血液中大量出现镰刀红细胞，患者因此缺氧 窒息 在高等植物中分布很广，根、茎、叶、花、果实、种子及胚芽鞘中都有，大多集中在生长旺盛部位 蛋白质工程 蛋白质工程： 以蛋白质空间结构及其与生物学功能的关系为基础，通过分子设计和由设计结果所指导的特定的基因修饰，而实现的对天然蛋白质的定向改造 目的： 对自然界存在的蛋白质加以改造，改造的目的是得到性能更符合人类要求的非天然蛋白质，以应用于工业、农业、医药卫生等各领域。同时，为分子生物学的基础理论研究提供强有力的新手段 蛋白质的改造 通过改造它们的基因，再用基因工程的方法由工程菌种来生产新的蛋白质 当前蛋白质工程研究的热点： 一方面是对具有明显生物学功能的天然蛋白质分子； 另一方面是基于生物大分子结构知识的药物设计 蛋白质人为进化 tRNA介导的蛋白质工程 tRNA-mediated protein engineering （TRAMPE） 通过拓展遗传密码，可以将人为设计的非天然氨基酸选择性掺入蛋白质，改进蛋白质的检测与分离方法 蛋白质修饰 N端-乙酰化（Acetylation） 甲酰化（Formylation） C-端酰胺化（Amidation，C-termainal） 磷酸化（Phosphorylation） 生物素修饰（Biotin） 环化修饰（N-端和C-端首尾成环、Lys和Asp或Glu环化） 肉豆蔻酸（Myristoyl） 香豆素修饰 pGlu焦谷氨酸修饰 FITC （异硫氰酸）荧光修饰 FAM荧光修饰 主要问题 ①改造对象有没有测定出空间结构 如果没有测定