使用微载体在生物反应器中制备Vero细胞狂犬病疫苗的试验 .docVIP

使用微载体在生物反应器中制备Vero细胞狂犬病疫苗的试验 一、材料 1、 微载体 GE公司Cytodex 1，25g 生物反应器 上海日泰公司Cellipower 5L，工作体积3.5L 加微载体25g（约7g/L） 细胞、毒种、培养液 二、操作过程 1、 微载体处理、反应罐准备 取微载体PBS溶液洗涤几次后室温下浸泡膨胀。弃去上清液，换上新的PBS。 2.56 0.7 2.98 变酸，关CO2开进碱 6-16 培养3天 2.12 2.5 6.19 6-17 培养4天，接毒 2.7 6.5 5.43 凌晨变碱，开CO2关进碱 四、 病毒培养及收获液检测结果 1、 病毒培养情况 日期 事项 灌注量L 病毒收获液 其他 6-17 洗换 7 6-18 收获1天 7 6-19 收获2天 7 6-20 收获3天 7 ，14L 6-21 收获4天 5 6-22 收获5天 5 ，12L 6-23 收获6天 5 6-24 收获7天 5 6-25 收获8天 5 ，15L 6-26 收获9天下罐 5 ，10L 收获液检测结果 批号 G抗原 PCR(100pg/ml) HCP.天坛 HCP.Cyg 残留牛血清 毒力 接毒1d 0.0 449 1.54 4.06 收毒1d 0.02 1481 1.65 6.44 收毒2d 0.23 9148 2.58 10.93 收毒3d 0.71 22607 16.13 收毒4d 1.40 77886 收毒5d 0.65 40071 3.28 14.37 收毒6d 0.73 42266 收毒7d 0.38 收毒8d 0.32 70536 4.61 17.03 0.13 610 1.59 1.86 ＞897 0.48 2282 1.99 5.73 ＞219 待测 0.54 1341 2.9 12.02 ＞115 待测 0.42 7029 4.45 11.51 未测 待测 五、 存在问题 1、 第一次试验，载体密度偏低，下次可装约12～15g/L 2、 接种细胞密度过高，3、4天就长满，下次可降低至1*105～2*105个/ml（总数3.5*108～７*108个） 3、 对微载体培养反应器操作不够熟练，排液时微载体附着并一直粘结在出液管筛网上，停止搅拌沉降载体后有部分载体凝结在罐底处等 4、 收获液残留牛血清偏高多倍，原因是洗换时为了不带出微载体，导致留在罐内的液体偏多，下次可将排液管安装低一点，或改良排液方式。 注：PCR结果只供大致判断用，可能有30%-300%的波动