2014年高中生物人教版选修一精讲导学课件：专题5 课题1DNA的粗提取与鉴定（39ppt）.pptVIP

* 专题5　DNA和蛋白质技术 课题1　DNA的粗提取与鉴定 一、提取DNA的方法和原理 1.思路与方法: (1)思路:选用一定的___________方法分离具有不同_______ _________的生物大分子。 (2)方法:利用DNA与__________________等在物理和化学性质 方面的差异,提取DNA,去除其他成分。 物理或化学 物理或 化学性质 RNA、蛋白质和脂质 2.原理: (1)分离原理:DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的_____溶液 中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的_______就能使____ 充分溶解,而使_____沉淀,或者相反,以达到分离的目的。 NaCl 盐浓度 DNA 杂质 (2)提纯原理: ①DNA不溶于_____溶液,但是细胞中的某些蛋白质则可溶于其 中。 ②_______能水解蛋白质,但对DNA没有影响。 ③大多数蛋白质不能忍受60℃～80℃的高温而发生变性,而DNA 在_____以上才会变性。 ④_______能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 酒精 蛋白酶 80℃ 洗涤剂 (3)鉴定: DNA+_______ 蓝色 二苯胺 沸水浴 _______ 二、DNA粗提取与DNA鉴定的实验设计 1.提取材料的选取及原则: (1)选用________相对较高的生物组织。 (2)细胞较容易破碎,其中的____容易提取。 DNA含量 DNA 2.破碎细胞,获取含DNA的滤液: (1)动物细胞的破碎: ①选材及方法:选用动物细胞作为实验材料时,由于其无 _______,因此可直接采用吸水涨破的方法。 ②过程:以鸡血为例 在鸡血细胞液中加入一定量的_______,同时用_______搅拌,细 胞会吸水涨破,然后用_____过滤,过滤后收集滤液即可。 细胞壁 蒸馏水 玻璃棒 纱布 (2)植物细胞的破碎: ①方法:需要先用_______溶解细胞膜。 ②过程:以提取洋葱的DNA为例 在切碎的洋葱中加入一定的_____________,进行充分地搅拌和 _____,过滤后收集研磨液。 洗涤剂 洗涤剂和食盐 研磨 3.去除滤液中的杂质: 方案一:利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中_____________,通过 控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 方案二:直接在滤液中加入_______,反应10 min～15 min,嫩肉 粉中的___________能够分解蛋白质。 方案三:将滤液放在___________的恒温水浴箱中保温10 min～ 15 min,注意严格控制温度范围。 溶解度的不同 嫩肉粉 木瓜蛋白酶 60℃～75℃ 4.DNA的析出:利用DNA不溶于_______________这一原理,可从 DNA溶液中析出比较纯净的DNA,此时DNA的状态为___________。 5.DNA的鉴定:将呈白色丝状物的DNA溶解于5 mL物质的量浓度 为__________________中,再加入4 mL的_______试剂,沸水浴 加热5 min,冷却后观察溶液的颜色,同时设计不含DNA的NaCl溶 液作为对照。 冷却的酒精溶液 白色丝状物 2 mol/L的NaCl溶液 二苯胺 三、操作提示 1.以血液为实验材料时,每100 mL血液中需要加入3 g _________,防止_________。 2.加入洗涤剂后,动作要___________,否则容易产生大量的 _____,不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时, 动作要轻缓,以免__________________,导致DNA分子不能形成 _________。 3.鉴定DNA用的染色剂_______试剂要现配现用,否则会影响鉴 定的效果。 柠檬酸钠 血液凝固 轻缓、柔和 泡沫 加剧DNA分子的断裂 絮状沉淀 二苯胺 【思考辨析】 1.判断正误 (1)用玻璃棒搅拌时,搅拌方向应顺时针和逆时针交替,这样 搅拌更充分。( ) 【分析】搅拌时,应缓慢沿一个方向搅拌,防止DNA断裂,以便 获得较完整的DNA。 (2)染色剂二苯胺可用甲基绿染色剂代替。( ) 【分析】甲基绿染色剂用来染色后观察DNA的分布,不能用来 进行DNA的鉴定。 × × (3)利用热变性的原理分离DNA和蛋白质后,可通过过滤将DNA和 蛋白质分开。( ) (4)可将鉴定试剂二苯胺先配制好,低温下保存,方便以后利 用。( ) 【分析】二苯胺试剂易变性而失去作用,因此要现配现用。 √ × 2.问题思考 (1)为什么不能用猪的红细胞作为材料来提取DNA? 提示：哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,因此细胞中无DNA分子。 (2)如果用植物细胞作为实验材料,操作过程和动物细胞有何区别? 提示：因为植物细胞具有细胞壁,不能吸水涨破,因此必须先通过切碎和