2015年湖南邵东三中高二人教版生物选修三课件：1.2 基因工程的基本操作程序 （共45张PPT） .pptVIP

2、表达载体的组成 1）启动子 2）终止子 3）目的基因 4）标记基因等 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ① 首先取出转基因生物的基因组DNA ② 用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 归纳步骤 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 P15思考与探究 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA （二）、鉴定（个体生物学水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— (分子 水平) 鉴定—— （个体水平） ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原抗体杂交 例：为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） a a 例：为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 基因枪法（花粉管通道法） 植物组织培养 脱分化和再分化 耐盐基因 一定浓度盐水浇灌 * * DNA复制主要在细胞内完成，以DNA的两条链为模板，根据碱基互补配对原则合成两个完全相同的DNA分子的过程。复制的条件是：以DNA双链作模板，以四种脱氧核苷酸为原料，需要线粒体供应，还需要多种酶，如解旋酶、DNA聚合酶等。 PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。它遵循的原理与DNA复制原理相同，条件是有一段已知目的基因的核苷酸序列和根据核苷酸序列合成的引物；原料是四种脱氧核苷酸，也需要多种酶，如DNA聚合酶。在PCR扩增仪上自动复制。 PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）,它是利用DNA 双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断的加以复制，使其数量呈指数方式增加。因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。 RNA聚合酶识别和结合的一段特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，RNA聚合酶与之结合才能驱动基因转录出mRNA，进而获得需要的蛋白质。 终止子 一段特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，作用是使转录在所需要的地方停止。 抗性基因鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 人教版选修3 现代生物技术专题 湖南邵东三中 杨连进 专题1 基因工程 课题2 基因工程的基本