文献研读李梵剖析.ppt

汇报人： 导师： 时间：2014年12月12日 感谢倾听 文献研读汇报 IF: 6.815 汇报内容 研究背景 材料方法 实验结果 结果讨论 我的思考 研究背景 TIR：Toll/Interleukin-1 receptor NB：nucleotide binding site LRR：leucine-rich repeat domains PCD：programmed cell death 1. 目前世界上的酿酒葡萄品种主要为欧洲种，而欧洲种为霜霉病和白粉病的易感品种。目前主要依赖农用化学品抗病，而依赖农用化学品抗病危害环境。通过转基因的方法来获取抗病基因并转入感病植株是一种优良的办法。 2. 圆叶葡萄具有抗霜霉病、抗白粉病、抗虫害、高产和高品质的特点。可作为抗病基因来源。 3. 圆叶葡萄第12条染色体上有7个TIR-NBS-LRR类基因。有文献指出植物（如拟南芥，莴笋）中这类基因为抗病基因。 材料方法 BAC：bacteria artificial chromosome 1. 圆叶葡萄和欧洲种葡萄的种间杂交植株部分可繁殖后代F1，F1经回交的后代BCs对霜霉病和白粉病具有抗性。 2. 以BC5:3294-R23为材料，构建BAC文库，并从中筛选含有标记（CB314.315与CB292.294）的基因片段，在此基础上进行后续功能验证及其他研究。 3. 霜霉菌和白粉病病菌侵染植株后都会引起细胞程序性死亡（PCD），叶面产生坏死斑。 实验结果 RGAs物理定位图 RGAs抗白粉病功能验证 RGAs抗霜霉病功能验证 MrRUN1/MrRPV1核质分布 5.MrRUN1和MrRPV1产生多个剪切片段 RGA：resistance gene analog. 抗病基因同源序列 实验结果1 同源序列氨基酸一致性百分比 (b)MrRGA的结构，包括TIR，NB，ARC和10-12个LRR，区别在于LRR的个数 (c)预测的MrRGA蛋白的特征 (d)同源序列氨基酸一致性百分比，均高于80％ ②TIR-NB-LRR类基因结构及同源性 实验结果1 红圈内的是编码TIR-NB-LRR蛋白的基因,是候选基因 ①MrRGAs遗传图和物理图定位 实验结果2 抗病葡萄 Shiraz Carignan Tempranillo Portan ①MrRGA基因抗白粉病的功能验证 转RGA10葡萄 农杆菌介导法将候选基因转入易感葡萄Shiraz,Tempranillp,Portan ,Maccabeu,Carignan中,以表皮细胞48h post inoculation后PCD 面积百分比为标准衡量 实验结果2 ①MrRGA基因抗白粉病的功能验证 MrRGA10在其中四种易感葡萄相对高表达 实验结果2 MrRUN1对白粉病病菌分离菌A的抗性 MrRUN1对白粉病病菌分离菌B的抗性 ②MrRUN1对不同白粉病菌分离菌的抗性 结论：MrRUN1对白粉病病菌分离菌A和B无抗性 AB来源于纽约，分别为LNYM和NY137 实验结果2 MrRUN1对白粉病病菌分离菌Musc4的抗性 来源于Georgia ②MrRUN1对不同白粉病病菌分离菌的抗性 总结：对不同分离菌具有不同的抗性，研究中仅对白粉病病菌分离菌Musc4无抗性。 结论：MrRUN1对白粉病病菌分离菌Musc4无抗性 实验结果3 ①MrRGAs基因抗霜霉病的功能验证 用霜霉菌喷洒转基因葡萄及抗病葡萄叶盘，用OIV（国际葡萄与葡萄酒组织）发病指数评价6dpi时的得病率，主要指标是孢子生成浓度和PCD面积。OIV得分5以上为抗霜霉病。 抗病葡萄 转RGA8葡萄 实验结果3 ①MrRGAs基因抗霜霉病的功能验证 通过孢子囊的生成情况进一步验证MrRGA8的抗霜霉病性能，由图中可以看出转RGA8葡萄显示出较强抗性 结论：MrRGA8对霜霉病具有抗性 实验结果3 ①MrRGAs基因抗霜霉病的功能验证 结论：MrRGA8基因使得葡萄对霜霉病具有抗性，命名为MrRPV1 hyp：hyphal菌丝生成 实验结果3 ②MrRPV1对不同霜霉菌分离菌的抗性 MrRPV1对霜霉菌A抗性 结论：MrRPV1基因使得葡萄对霜霉菌A具有抗性 霜霉菌A来自于法国 5 实验结果3 ②MrRPV1对不同霜霉菌分离菌的抗性 MrRPV1对霜霉菌B抗性 结论：MrRPV1基因使得葡萄对霜霉菌B有抗性 霜霉菌B来源于北美 实验结果3 ②MrRPV1对不同霜霉菌分离菌的抗性 MrRPV1对霜霉菌SL抗性 结论：MrRPV1基因使得葡萄对霜霉菌SL有抗性 总结：MrRPV1基因使得葡萄对不同分离菌都有抗性 实验