基因工程与其应用课件(上课).ppt

一、基因工程与基因 二、基因的认识 基因工程诞生的理论基础: 非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。 基因工程：即 。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。 　 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 DNA连接酶的作用过程 ① 概念：PCR全称为聚合酶链式反应技术，是一项在体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或序列的技术 。 ③条件：目的基因或序列、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶、一对引物(做启动子) ②原理： DNA复制 ④方式：以指数方式扩增。 ⑤结果： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 利用PCR技术扩增目的基因 ①90-95℃变性 ② 50-65℃退火 ③70-75℃延伸 PCR反应过程： 20-40个PCR循环 1个PCR 循环 过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性50℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 1、基因工程与作物育种 Golden rice and normal (white)/ wsjbiotech.html 转2个 水仙花 和1个细菌VA合成酶基因的水稻 “金米” （Antifreeze Proteins AFPs) 避免细胞结冰 有助植物抗冻 抗冻糖蛋白 无冰晶细菌帮助草莓抗霜冻 降低原生质冰点 抑制冰晶重结晶 修饰冰晶形态 调节原生质胶体性质 抗虫转基因植物 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 2、基因工程与药物研制 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 　　许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 　　微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。 　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 　　将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！使其价格降低了30%-50%! SmaⅠ 平末端　　　平末端 ②产生平末端:如SmaⅠ限制性核酸内切酶 切割的化学键：磷酸二酯键 例：限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①请画出质粒被限制性核酸内切酶Ⅰ切割后所形成的粘性末端。 ②请画出目的基因两侧被限制性核酸内切酶Ⅱ切割后所形成的粘性末端 下列关于限制性核酸内切酶的说法正确的是（ ） A.限制性核酸内切酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制性核酸内切酶切割DNA后都会形成粘性末端 D.限制性核酸内切酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 B 限制酶是一群核酸切割酶，可辨识并切割DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶 BamHI , EcoRI , Hind Ⅲ以及 BgIⅡ的辨识序列： 箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端，可以互补结合？其正确的末端互补序列为何？（ ） A．BamHI和EcoRI；末端互补序列－AATT－ B．BamHI和Hind Ⅲ；末端互补序列－GATC－ C．BamHI和BgIⅡ；末端互补序列－GATC－ D．EcoRI和Hind Ⅲ；末端互补序列－AATT－ C 2、基因工程的 指“DNA连接酶” “ ” 作用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子 点击播放 　　 DNA连接酶的作用位点是：相邻的两个脱氧核苷酸的切口。即生成：磷酸二酯键。 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段