westernblot研究报告.pptVIP

。  . 四、电泳 一、上样： Marker点在左边（需要添加） 二、跑电泳：电泳时通常推荐在上层胶时使用低电压恒压电泳，而在 溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。对于Bio-Rad的标准 电泳装置或类似电泳装置，低电压可以设置在80-100V，高电压 可以设置在120V左右。当溴酚蓝到达凝胶底部附近时即可停止电 泳，或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况，预计目的 蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。 六、转膜后检测（此步可以省略） 丽春红染色 蛋白带出现后，于室温用去离子水漂洗硝酸纤维素滤膜，换水几次。 转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的TBST（或PBST）中漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。 从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。 转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。 八、曝片 一、配液1:1，把NC放入，摇床5min 二、取出，放在保鲜膜的夹片