清华大学微生物学节剖析.ppt

干法保藏菌种的方法 滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法（L-干燥法） 冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒） 滤纸片 薄片状载体 明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成） 血清蛋白小片（…乙烯薄膜… ） * 第五节 菌种的衰退、复壮和保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的 基本要求，否则生产或科研都无法正常进行 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异；b）污染； c）死亡。 一、菌种的衰退与复壮 菌种衰退的表现： 原有形态性状变的不典型了 生长速度变慢，产孢子变少 代谢产物生产能力下降 致病菌对宿主的浸染力下降 对外界不良条件抵抗力下降 衰退：由于自发突变的结果，使某物种原有 一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 一、菌种的衰退与复壮 菌种衰退的原因：大量群体中的自发突变 纯菌种 自发突变 不纯菌种 突变个体 传代增殖 原始个体 衰退菌种 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： 二、防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）利用单核体传代； 4）采用有效的菌种保藏方法； （二）菌种的复壮 ①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） ； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。 三、菌种保藏 1.保藏目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用 菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 国内外菌种保藏机构： 三、菌种保藏 原种：用于长期保藏的原始菌种称为保藏菌种或原种。 基本原则：1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 3.菌种保藏的方法 3、方法：①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。