S型和R型人参皂苷Rh_2对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡影响.docVIP

S型与R型人参皂苷Rh_2对人肺腺癌A549 细胞增殖和凋亡的影响 ±s表示，次啊用SPSS11.5软件进行统计处理，组间差异采用t检验进行处理，P0.05表示差异具有统计学意义。 3 结果 3.1 人参皂苷Rh2对A549细胞增殖的抑制作用 助溶剂DMSO阴性对照组A570与A549细胞对照组相比我明显改变。S型和R型-Rh2各剂量组与对照组相比，A570均明显下降（P0.05）。25mg·L-1 的20（R）-Rh2和20（S）-Rh2作用48h对肿瘤细胞株A549的增殖抑制率分别为28.5%，33.6%，IC50分别为33.4,28.5mg·L-1 ，说明人参皂苷Rh2具有抑制A549细胞增殖的作用，并且该抑制作用呈剂量依赖性。（图1）。 3.2 人参皂苷Rh2对A549细胞周期的阻滞作用 20mg·L-1 的20（S）-Rh2作用24h可影响A549细胞周期各时相的分布，G0/G1期细胞比例（78.2%）显著高于对照组（64.2%）（P0.05），G2/M期细胞比例（8.7%）与对照组（11.5%）比较无显著性差异。而20mg·L-1 的20（R）-Rh2组A549 G0/G1期细胞比例67%，S期细胞比例22.6%，G2/M期细胞比例10.4%，均与对照组比较无显著性差异。比较C-20位各异构体的抗肿瘤活性，可以看出，20（S）-Rh2能阻滞细胞周期于G1期。（表1） 3.3 人参皂苷Rh2促进A549细胞凋亡的作用 流式细胞分析仪检测结果显示，30mg·L-1 的20（R）-Rh2和20（S）-Rh2作用24h均可明显促进细胞凋亡，且S型效果显著。定量分析结果表明（表2），S型和R型人参皂苷Rh2组无论是早期还是晚期凋亡率均明显高于正常组细胞（P0.01），并且20（S）-Rh2组早期凋亡率明显高于20（R）-Rh2组（P0.05），说明人参皂苷Rh2具有促进A549细胞凋亡的作用，并且具有构效效应。 3.4 倒置荧光显微镜下观察Caspase-3活性30mg·L-1 的20（R）-Rh2和20（S）-Rh2作用6h的细胞中标记Caspase-3活性的荧光亮度明显增强。说明Caspase-3的激活参与了Rh2诱导的A549细胞凋亡。（图2）。 4 讨论 肿瘤的产生是丧失细胞只能调控的结果。生长信号的异常和细胞周期调控的异常将导致细胞增殖的异常，最终产生恶性克隆。研究进展表明，肿瘤共性的生物学特征是失控性生长，其主要分子机制是细胞周期紊乱导致细胞增殖过多和凋亡过少。因此，可以说肿瘤是细胞失控性生长所致的一类细胞周期性疾病。细胞周期调控的信号转导途径及其反馈环路上的一系列调节基因组成复杂的网络精确地调控细胞周期。肿瘤细胞的特征之一，也是抗肿瘤药物的基本要求。另外，肿瘤细胞在不同程度上缺乏成熟的形态和完整的功能，丧失某些终末分化细胞的性状，并常对正常的分化调节机制缺乏重视，认为正常细胞通过增殖和凋亡来维持自身稳定，若两者失衡，则可导致肿瘤发生，因此诱导肿瘤细胞凋亡也是抗肿瘤的一种中药机制。 到目前为止，已发现的具有肿瘤细胞毒活性的人参皂苷均为人参次苷和苷元，并且抗肿瘤活性与化合物结果存在很大的关系。在抗肿瘤方面，20（S）-人参皂苷Rh2、化合物CK和20（S）-原人参二醇等人参次苷及苷元表现出明显的构效关系。 研究表明，20（S）-人参皂苷Rh2的抗肿瘤作用与阻滞细胞周期有关，但其阻滞细胞周期的机制在不同的报道以及不同的细胞系中所得到的结果不尽相同。多种和G1期相关的细胞周期调节蛋白被Rh2所调节，结果导致Rh2诱导的G1期细胞生长受到阻滞，最终导致细胞发生凋亡。在对人肺癌多种G1期相关的细胞周期调节蛋白如Cyclin-D1，Cyclin-E，CDK6和pRb，导致G1期生长阻滞。而DR4死亡受体的上调在Rh2诱导的A549凋亡中扮演了关键的角色，最终通过Xaspase-8/Caspase-3外源性凋亡通路发生细胞凋亡，而Bcl-2家族分子的水平却没有变化。周东波等却报道人参单体Rh2可通过上调P53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡。不同的机制都表明，G-Rh2可以通过影响细胞周期蛋白（Cyclin）和周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）的表达调控G 1/S期阻滞点，引发G1期阻滞带。 本实验的预试验结果表明，没有转化的5个人参皂苷Rb1，Rb3，Rg1，Re和Rd对A549毒活性较弱，其IC50值均大于100mg·L-1 ，这和文献报道的鲜人参提取物没有抗肿瘤活性项一致。人参皂苷经降解后生成的人参次苷表现出明显